[发明专利]一种黄芪试管苗培养的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及组培条件下黄芪幼苗的培养，尤其是寡糖素对黄芪试管苗中黄芪皂苷的调控。

背景技术

黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。具有降低血液黏稠度、减少血栓形成、降低血压、保护心脏、双向调节血糖、抗自由基损伤、抗衰老、抗缺氧、抗肿瘤、增强机体免疫力作用，可用来治疗心脏病、高血压、糖尿病等症。黄芪还能扩张血管，改善皮肤血液循环和营养状况，故对慢性溃疡久不愈合者有效。其还能消除肾炎患者的蛋白尿，保护肝脏，防止肝糖原减少，主要成分含黄酮、皂甙类成分。

黄芪皂苷

英文名称：Astragaloside  分子式：C₄₃H₆₈O₁₆分子量：840.99分子结构:

黄芪的有效药用成分为黄芪皂苷，文献报道，药材中黄芪皂苷类成分含量较低，利用比色法对黄芪根，茎，叶黄芪皂苷的含量进行了测定，研究发现黄芪根中总皂苷含量为0.2616%，茎叶总皂苷含量为0.2162%，如何提高培养物中有效成分的质量和含量，扩大培养规模，最终工业化生产这些物质，是这一研究领域的重点。

寡糖素作为一种糖类生物农药，可有效防治一些真菌病害，影响植物的生长发育。近年来的研究发现寡糖素对植物的抗性，形态发生及植物培养细胞的生长速率和次级代谢产物的合成等都具有一定的调控作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供黄芪试管苗的快速繁殖方法，并通过寡糖素对试管苗生长和次生代谢物质的调控，获得生长良好，次生代谢物含量高的黄芪试管苗，可以选育出优良的黄芪品种，快速规模化的生产种植黄芪幼苗，对制药领域的进一步开拓具有重要的现实意义。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

工艺步骤为：取黄芪带芽茎段，洗衣粉浸泡4分钟，流水冲洗1-2小时，经次氯酸钠消毒处理10-12分钟，无菌水冲洗5遍，用吸水纸吸去无菌外植体表面的水分。腋芽的诱导，经过无菌处理过的黄芪芽接种到B₅+0.2 mg/LNAA+1.0 mg/LKT的培养基中进行腋芽诱导。以诱导出的黄芪腋芽为材料，加入MS+0.2 mg/LNAA+0.2 mg/LMS的培养基中进行腋芽增值培养，增值培养3-4代加入WPM+1mg/LNAA+2 mg/L6-BA中进行生根诱导，取诱导出的带根的健壮幼苗加入4mg/L的寡糖素对其生长及次生代谢物质进行调控，30天后精确检测黄芪皂苷的含量，取黄芪干样1g，研磨成粉，过80目筛，加入85%乙醇，用超声波提取1min，每间隔2min超声提取1min，共提取30min，滤过，85℃水浴加热回流1h，于旋转蒸发仪上真空浓缩，加25ml乙醇定容至25ml，使用UV法检测黄芪皂苷的含量。

采用本发明调控出来的试管苗长势好，黄芪皂苷含量0.2911%，周期短，操作可控，可进行工业扩大化生产。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取黄芪带芽茎段，洗衣粉浸泡4分钟，流水冲洗1-2小时，经次氯酸钠消毒处理10-12分钟，无菌水冲洗5遍，用吸水纸吸去无菌外植体表面的水分，腋芽的诱导，经过无菌处理过的黄芪芽接种到B₅+0.2 mg/LNAA+1.0 mg/LKT的培养基中进行腋芽诱导，以诱导出的黄芪腋芽为材料，加入MS+0.2 mg/LNAA+0.2 mg/LMS的培养基中进行腋芽增值培养，增值培养3-4代加入WPM+0.2mg/LNAA+0.5 mg/L6-BA中进行生根诱导，取诱导出的带根的健壮幼苗加入2mg/L的寡糖素对其生长及次生代谢物质进行调控，30天后精确检测黄芪皂苷的含量，取黄芪干样1g，研磨成粉，过80目筛，加入85%乙醇，用超声波提取1min，每间隔2min超声提取1min，共提取30min，滤过，85℃水浴加热回流1h，于旋转蒸发仪上真空浓缩，加25ml乙醇定容至25ml，使用UV法检测黄芪皂苷的含量。黄芪皂苷含量达0.2819%。

实施例2