[发明专利]一种食用油中苯并芘的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品分析领域，具体涉及一种食用油中苯并芘的检测方法。

背景技术

苯并芘又称苯并（а）芘，英文缩写BaP，是一类具有明显致癌作用的有机化合物。它是由一个苯环和一个芘分子结合而成的多环芳烃类化合物。经检测，多次使用的高温植物油、油炸过火的食品都会产生B(a)P，反复使用高温煎炸方式，食物中的有机质受热分解，经环化、聚合而形成B(a)P等致癌成分。

食品中苯（а）芘系多环芳烃污染痕量分析成为一个重要课题，准确测定食品中的痕量苯并芘尤为重要。现有的检测苯并（а）芘的方法主要有:（1）荧光分析法可以通过苯并（а）芘的特征荧光谱进行表征，对一些复杂混合物分析常出现光谱相互重叠、不易分辨，即使采用一些新技术如同步荧光、倒数荧光可以提高分辨率，但能分辨的个数有限，往往需要对样品进行预分离且操作繁琐；（2）液相色谱-荧光检测技术其分离方法大多为梯度淋洗，尽管能够实现多环芳烃的分离，但液-液萃取的方法需要耗费大量的超纯试剂，并且萃取液有时会出现乳化现象，分析时间长（我国国家标准为60min），既浪费试剂又容易导致误差，并存在基线漂移的问题；（3）气相色谱-质谱（GC-MS）方法可以准确鉴别苯（а）芘，但洗脱时间长（30～60min）；还必须定期用标准液校准保留时间，对含有4～6个苯环的高沸点PAHs气化困难，无法进行分离分析，对具有相似质量碎片谱的不同物质也无法分辨；（4）酶联免疫分析方法（ELISA）是近几年发展起来以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的新型分析技术。但此法测定PAH并与HPLC测定的结果进行了对比，没有发现假阴性的样品，但是存在18%假阳性样品存在。

在目前已发展了多种分离和检测PAH物质的方法中，HPLC方法和GC-MS方法应用普遍，测量精度高，适于标准化，但对于复杂的食品基质，分离度受到很大的限制，往往需要进行复杂的样品处理，特别是前处理中要使用活性氧化铝柱进行分离，对氧化铝的质量要求较高。其中，国标GB/T22509-2008《动植物油脂苯并芘的测定中油的苯并（а）芘》项目检测步骤较为繁琐，中性氧化铝填料的活性直接影响到检测结果的稳定性，而且调节好活性的中性氧化铝放置时间不宜过长，影响检测的便捷性。

高效液相色谱法以及杨占南等在《食品科学》杂志发表的贵阳市油炸食品中苯并（а）芘的测定及其安全评价，采用皂化法去除油脂进行检测，由于苯并（а）芘的易挥发性，如果按照加热回流的方法进行皂化，极易造成苯苯并（а）芘的挥发而影响检测结果，本发明对油的皂化温度和皂化时间进行了优化，使检测过程操作简便，节省时间，并保证了检测结果准确。

发明内容

本发明要解决的技术问题：针对现有技术中存在的前处理复杂，稳定性不好，检出范围过窄，添加回收率低等问题，本发明采用50℃的水浴中皂化1h，具有操作简单，稳定好，添加回收率高的优点。

本发明采用的技术方案：食用油中苯并芘的检测方法，包括以下步骤：

（1）前处理的方法：称取0.5g的油样，加入5mL1mol/L氢氧化钾乙醇水溶液振荡至澄清后，继续振荡1min，于50℃的水浴中皂化1h，待冷却到室温，往样品离心管中加入5ml超纯水，摇匀，再加入15ml正己烷，并在涡旋混合器上混匀，离心，将上清液移入试管中，并在往样品离心管中加入10ml的正己烷，同上步骤操作，将合并的两次提取液，用5ml超纯水洗涤2次，提取液置于氮吹仪中浓缩至干，用四氢呋喃+乙腈=2+8混合溶液1.0mL定容，0.45um滤膜过滤后上机测定；

（2）用配有荧光检测器的高效液相色谱仪分析，得到食用油中苯并芘的测试结果。

其中，高效液相色谱仪的色谱条件为流动相：乙腈：水=88:12；流速：1.0ml/min；柱温：30±2℃；色谱柱型号：EclipsePAH5μm4.6×250mm；发射波长：406nm（狭缝10nm）,激发波长：384nm(狭缝10nm)。

本发明达到有益效果：与本发明较为接近的现有技术杨占南在《食品科学》杂志发表的“贵阳市油炸食品中苯并（а）芘的测定及其安全评价”，采用皂化法去除油脂进行检测，由于苯并（а）芘的易挥发性，如果按照文献加热回流的方法进行皂化，极易造成苯苯并（а）芘的挥发而影响检测结果，本发明对油的皂化温度和皂化时间进行了优化，使检测过程操作简便，节省时间，并保证了检测结果准确。具体有益效果通过下列实施的数据来说明。

具体实施方式

实施例1

（1）重复性实验