[发明专利]一种对虾抗病毒Argonaute蛋白及其编码cDNA和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种对虾抗病毒Argonaute蛋白及其编码cDNA，以及该对虾抗病毒Argonaute蛋白及其编码cDNA在降低病毒感染对虾死亡率及在抗病育种中的用途。

背景技术

我国是养殖虾的主要生产国之一，2011年的海水养殖对虾产量达到230万吨，约占全球总产量的一半以上，在我国的水产业中具有举足轻重的作用。但养殖对虾时常暴发的疾病却造成巨大的经济损失。在过去的十几年里,对虾白斑综合征病毒(WSSV)等多种病毒引起的大规模流行病给世界各地的养虾业带来了毁灭性的打击。至今，白斑综合征病毒仍是对虾养殖业的头号威胁。此外，一些RNA病毒如桃拉病毒(TSV)、黄头病毒(YHV)等病毒病依然是对虾养殖业的重要威胁。

最近，通过研究致病机理开发的抗病蛋白及方法增强对虾免疫力和抗病力成为对虾病毒病防治的重要方向。病毒感染细胞后首先将自身的遗传物质进行大量复制，在此过程中，无论是DNA病毒还是RNA病毒均会产生转录的中间产物dsRNA。该dsRNA既可作为信使RNA（mRNA），又能作为病毒基因组的模板。mRNA翻译结构蛋白，装配内层衣壳后，病毒核酸进入，通过重复上述过程，最后获得了外层衣壳，并形成病毒粒子。宿主自身存在的古老的免疫机制，即基因沉默（RNAi）机制可有效干扰病毒复制过程。

基因沉默（RNAi）是生物体一种古老的防御机制。外源性的长dsRNA或内源性的微小RNA前microRNA（pre-miRNA)在生物体分别被Dicer酶剪切为siRNA或miRNA，诱导同源靶基因mRNA特异性降解，从而导致靶基因沉默。为了对抗及逃逸这种RNAi先天免疫，多种病毒编码了RNAi抑制蛋白，通过在RNA或蛋白质水平的作用来抑制RNAi通路。野田村病毒编码一种RNAi抑制蛋白B2，该蛋白可以通过直接作用于果蝇Dicer-2，抑制抗病毒siRNA产生及RNA沉默复合体（RISC）组装来逃逸宿主的免疫系统。此外，RNAi机制中的关键蛋白TRBP可抑制干扰素诱导的蛋白激酶活性，从而增强病毒的复制。因为这一关键作用，TRBP成为治疗HIV-1的新型靶标。因此，RNAi机制及其关键因子的功能和作用对宿主的病毒防御功能至关重要。

Argonaute蛋白是RNAi机制中RNA诱导沉默复合物(RISC复合物)的核心元件，能够结合非编码小分子RNA，控制蛋白质的合成，影响mRNA的稳定性甚至参与同Piwi蛋白相互作用的RNA的生产。小RNA通过与Argonaute蛋白结合，达到调控基因表达的目的。Argonaute蛋白在RNAi通路中发挥的重要作用包括在动植物中对靶mRNA进行切割或翻译水平的抑制以及在转录或转录后水平控制转座元件的移动等。通过增强RNAi通路关键因子的作用，提高宿主的免疫防御功能，从而对外源病毒具有显著防御作用。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种对虾抗病毒Argonaute蛋白。

本发明的第二个目的是提供编码上述对虾抗病毒Argonaute蛋白的新cDNA。

本发明的第三个目的是提供含有上述cDNA的表达载体。

本发明的第四个目的是提供一种能与上述对虾抗病毒Argonaute蛋白特异性结合的抗体。

本发明的第五个目的是提供上述对虾抗病毒Argonaute蛋白的用途。

本发明的第六个目的是提供上述编码对虾抗病毒Argonaute蛋白cDNA的用途。

本发明提供的对虾抗病毒Argonaute蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明中，编码上述对虾抗病毒Argonaute蛋白的cDNA的核苷酸序列为如SEQ ID NO.1所示。

本发明通过在斑节对虾转录组中筛选获得Argonaute蛋白的部分序列，然后通过RACE技术克隆到斑节对虾Argonaute蛋白基因的全表达序列。对虾Argonaute蛋白基因全长2845bp，其开放阅读框长2616bp，包括106bp 5’-非编码区(5’-UTR)，起始于ATG，123bp 3’-非编码区(3’-UTR)，终止于TGA。该基因编码871个氨基酸组成的蛋白，分子量为99.5KDa。该基因在免疫器官中高表达，并在微生物感染早期具有重要功能，该基因可应用于对虾的病害控制。

本发明提供的表达载体含有上述的cDNA。

本发明的提供的与上述对虾抗病毒Argonaute蛋白特异性结合的抗体为重组Argonaute蛋白经动物免疫后制取所得。