[发明专利]用于鉴定哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系的标记及方法

说明书

技术领域

    本发明涉及棉花分子育种技术领域，具体是一种用于鉴定哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系的标记及方法。

背景技术

杂交棉是我国棉花获得高产的重要途径。人工杂交棉已经在长江流域棉区和黄河流域棉区广泛应用。近年来随着用工成本的增加，人工去雄杂交制种成本居高不下，杂交棉推广受到影响。利用棉花胞质雄性不育三系配套制种方式具有省工、种子纯度高、成本较低等优点。在我国棉花种植面积下滑的情况下，利用棉花胞质雄性不育三系配套制种方式是棉花杂交种生产发展的必然趋势，是保证总产基本稳定的重要战略手段。

目前，以哈克尼西棉细胞质雄性不育材料为基础的三系配套材料已经在我国得到成功应用。但是，与人工制种相比，可用的亲本资源仍然很少，特别是具有强恢复力的优良恢复系材料仍然是三系杂交棉选育的主要限制因素。因此，在三系杂交棉选育过程中，具有强恢复力的优良恢复系选育和改良一直是研究的重点和难点。而采用常规育种技术选育和改良新恢复系材料需要年限长，且每年转育后都需要进行大量的田间测交和鉴定工作，以确保恢复基因在转育和改良过程中没有丢失，从而需要耗费大量的人力和财力。因此，如何通过分子标记辅助选择技术，既稳定可靠又快速简便地进行恢复系选育和改良成为三系杂交棉发展的关键环节。

发明内容

本发明为了解决哈克尼西棉胞质不育恢复系田间测交和鉴定工作所需时间长、消耗大、准确性差等问题，提供了一种用于鉴定哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系的引物及方法，从而可以加快恢复系选育和改良进程，同时保证恢复系的纯合性。

本发明是通过以下技术方案实现的：用于鉴定哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系的标记（SSR标记NAU5121），其为核苷酸序列如SEQ ID NO.1和2所示的引物。

SSR标记NAU5121引物：

正向引物5^，- AGGGCAAATTTCATCTCTCT -3^，（SEQ ID NO.1）

反向引物5^，- AAAGCTTGACCGAAATCAAC -3^，（SEQ ID NO.2）

本发明所述SSR标记NAU5121引物来自CMD网站www.cottonmarkers.org。

本发明还提供了SSR标记NAU5121在鉴定哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系中的应用。

本发明采用SSR标记NAU5121（SEQ ID NO.1和2所示的引物）的鉴定方法为：用SEQ ID NO.1和2所示的引物扩增待测哈克尼西棉样本的基因组DNA；同时具有170bp处和190bp处的两条扩增带的样本为具有恢复基因的杂合株，具有170bp处扩增带且不具有190 bp处扩增带的样本为哈克尼西棉胞质不育纯合恢复株，该恢复株扩繁获得纯合恢复系。以传统方法（田间测交和鉴定）为验证，证明采用本发明所述SSR标记NAU5121对待测样本是否为哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系的鉴定，其准确率为97%以上，SSR标记NAU5121与哈克尼西棉胞质不育恢复基因Rf₁遗传距离为0.4cM，为共显性标记，能够快速鉴定可育株是否为纯合恢复系，其次与传统方法相比，哈克尼西棉胞质不育恢复系的鉴定工作量减少70%。

进一步，对于育种群体较大的后代，本发明还提供了一种快速鉴定哈克尼西棉胞质不育纯合恢复系的方法，该方法中提供了一种用于鉴定是否携带有恢复基因的标记引物PF1，其为核苷酸序列如SEQ ID NO.3和4所示的引物。

标记引物PF1：

正向序列：5^，-CAAGATATGGGTAAGCTTCC -3^，（SEQ ID NO.3）

反向序列：5^，-TAACAACATTAGGCTCGATTT -3^，（SEQ ID NO.4）