[发明专利]一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物有效成分的提取分离纯化领域，具体涉及一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法。

背景技术

葛根为豆科植物野葛的干燥根，是常用的中药材，历代以来本草均有记载，味甘、辛、性平，可解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒。目前，葛根广泛用于改善心脑血管疾病，在治疗腹泻、糖尿病等重要复方制剂中，用量极大，是制剂的重要成分。《中华人民共和国药典》和《卫生部药品标准》中收录大约有140余种葛根复方制剂，其中主要有葛根片剂、针剂等。葛根主要有效成分为葛根总黄酮，尤其野葛含葛根总黄酮较多，主要作为葛根制剂、药品、保健品等的原料。医药方面，葛根黄酮目前主要用于治疗心脑血管类疾病，如高血压、高血脂、偏头痛、冠心病、心肌梗塞等症，替代中成药中的中药葛根。同时因其毒性较低及显著独特的生物活性，葛根黄酮被作为天然添加剂，广泛用于保健食品（解酒、延缓女性更年期、糖尿病引起的并发症等）或食品、化妆品行业（如食用色素、甜味剂、抗氧化剂等）等领域。

葛根中含有的黄酮类化合物多以糖苷的形式存在，一般提取时多采用水、甲醇、乙醇溶液做提取溶剂，用正丁醇做萃取剂。但是选用的提取剂往往毒性较大，提取时间也较长，耗时耗能。

微波辅助技术是利用微波场的体积加热和选择性加热的功能，加速提取过程的进行。选用对微波透明或半透明的并且对目标成分有较强溶解能力的介质做溶剂，在微波场中，对微波不透明的材料内部分子在微波作用下相互碰撞、挤压，有利于目标成分的快速浸出。微波法具有高选择性和高效性，大大缩短了反应时间的同时，又可以提高反应收率。

双水相萃取技术（Aqueous two-phase extraction,ATPS）又称水溶液两相分配技术，是近几十年来研究并发展起来的一项极具发展前景的新型萃取分离技术。双水相萃取技术但由于其条件温和，质量传输快，成本低，易操作，可调节，容易放大，可连续操作等特点，与传统的有机溶剂萃取体系相比较，在生物物质的分离中有独到的优越之处。传统的高聚物/高聚物或高聚物/无机盐双水相体系，已经成功用于分离和提取各种蛋白质（多肽和酶），分离和提取各种抗生素、氨基酸、金属和中药的有效成份等领域。

高聚物形成的双水相体系，虽然萃取效率高，但所用的聚乙二醇（简称PEG）和葡聚糖（简称Dextran）成本太高，而且体系黏度大，回收难，因而成本高，不适于工业大规模生产。而低级醇（如乙醇）与盐的水溶液形成的双水相体系毒性低，对有机溶剂的回收操作简便，可反复利用，成本低。其原理是利用盐离子的水化作用，与乙醇共同竞争水分子从而形成乙醇水溶液和盐的水溶液两相。当生物物质或天然产物中的有效成分进入双水相体系时，由于表面性质、电荷作用和各种力（憎水键、氢键和离子键）的存在和环境因素（浓度、温度、pH值以及离子的种类和强度等）的影响，生物物质或天然产物中的有效成分易在两相间形成选择性的分配。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术而提供一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法，不但避免了有毒萃取溶剂的使用，提高了葛根中总黄酮的提取率，且使提取和分离步骤一步完成，极大简化了操作步骤。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）配制双水相体系：取无机盐，加入水溶解，加入有机溶剂，即分相成为双水相提取剂；

2）微波辅助双水相提取：向步骤1）所得双水相提取剂中加入葛根粉，采用微波辅助提取，抽滤得明显分相的葛根黄酮提取液。

按上述方案，所述的无机盐为三水磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，碳酸钾或硫酸铵。

按上述方案，所述的有机溶剂为无水乙醇，所述的无水乙醇用量为双水相提取剂总质量的35%-55%。

按上述方案，所述的无机盐的用量为双水相提取剂总质量的20%-40%。

按上述方案，所述的葛根粉与双水相提取剂固液比为1∶5-1∶30，单位是g∶ml。

按上述方案，所述的微波辅助提取的提取温度为40℃-90℃，提取时间为5-20分钟，微波功率为400-700W。

按上述方案，所述的双水相提取剂的pH为7-11。