[发明专利]棕色棉纤维色泽基因Lc1的辅助选择的分子标记及用途有效
| 申请号： | 201310407326.1 | 申请日： | 2013-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN103436624A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 李晓波;王利祥;刘海峰;肖向文;李雪源;罗城;王俊铎;宋武;艾先涛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院新疆理化技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐中科新兴专利事务所 65106 | 代理人： | 张莉 |
| 地址： | 830011 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 棕色 棉纤维 色泽 基因 lc sub 辅助 选择 分子 标记 用途 | ||
1.一种用于棕色棉纤维色素决定基因Lc1辅助选择的分子标记，其特征在于扩增该分子标记的引物的核苷酸序列为：
标记NAU1043，其上游引物：5’-GTATCCGCCCACAAATAAAG-3’，下游引物：5’-CATTACAGTCACCTGCATC-3’；标记NAU2862，其上游引物：5’-CAACAGCATCAGCTGAAAAC-3’，下游引物：5’-AAGAAAACACAGCAACAGCA-3’。
2.根据权利要求1所述的用于棕色棉纤维色彩的基因Lc1 辅助选择的分子标记，其特征在于标记NAU1043与Lc1的遗传距离为3.85cM，标记NAU2862与Lc1遗传距离为7.75cM。
3.根据如权利要求1所述的用于棕色棉纤维色彩的基因Lc1 辅助选择的分子标记的方法，其特征在于将所述的分子标记用于SSR标记筛选时的反应程序为：
a、PCR反应体系体积为20μL，包含10 x PCR 缓冲液2μl，dNTPs(10mM)1μl ，Taq DNA聚合酶(2 U/μl) 1 U，SSR上下游引物(5μM)各0.5μl和基因组DNA (40ng/μl) 1μl；ddH2O 14.7μl，其中10 x PCR 缓冲液为10mM Tris-HCl, pH8.3, 50mM KCl, 1.5mM MgCl2-；
b、扩增程序为温度94oC预变性 4 min；温度94oC 变性40s， 温度57oC复性45s，温度72oC 延伸50sec，35个循环；温度72oC 延伸10 min，扩增产物在温度4℃保存；
c、扩增后的样品与10μl的上样缓冲液混合，温度95oC变性10 min，立即转移至冰浴冷却，用于电泳，采用垂直板变性聚丙烯酰胺凝胶7 %电泳法对SSR扩增产物进行分离，120V预电泳10 min，180 V恒压电泳4 h；采用EB染色后，拍照。
4.一种如权利要求1所述的分子标记在制备棉花品种纤维色泽早期选择或品种鉴定中的用途。
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