[发明专利]棕色棉纤维色泽基因Lc2辅助选择的分子标记及用途

权利要求书

1.一种用于棕色棉纤维色素决定基因Lc₂辅助选择的分子标记，其特征在于扩增该分子标记的引物为所示的核苷酸序列：

标记NAU5433,其上游引物：5’-CTTAGGATGGCCGAATAAAA-3’，下游引物：5’- CAAGTGCTCCACCACAAAT-3’；标记NAU2968，其上游引物：5’-CCCATTTCGTTCTTATCGTT-3’，下游引物：5’- GCATCGTGAGAGAAAGTGAA-3’。

2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于标记NAU5433与Lc₂的遗传距离为4.4cM，标记NAU2968与Lc₂的遗传距离为7.4cM。

3.根据权利要求1所述的用于棕色棉纤维色彩的基因Lc₂辅助选择的分子标记的方法，其特征在于将所述的分子标记用于SSR标记筛选时的反应程序为：

a、PCR反应体系体积为20μl，包含10 x PCR buffer 2μl，dNTPs 10mM  1μl ，Taq DNA聚合酶 2 U/μl  1U，SSR上下游引物5μM各0.5μl和基因组DNA 40ng/μl  1μl，ddH₂O 14.7μl，其中10 x PCR buffer为10mM Tris-HCl, pH 8.3, 50mM KCl, 1.5mM MgCl_2-；

b、扩增程序为温度94^oC预变性 4 min；温度94^oC 变性40 s， 温度57^oC复性45 s，温度72^oC 延伸50 sec，35个循环；温度72^oC 延伸10 min，扩增产物在温度4℃保存；

c、扩增后的样品与10μl的上样缓冲液混合，温度95^oC变性10 min，立即转移至冰浴冷却，用于电泳，采用垂直板变性聚丙烯酰胺凝胶7%电泳法对SSR扩增产物进行分离，120V预电泳10 min，180 V恒压电泳4 h，采用EB染色后，拍照。

4.一种如权利要求1所述的分子标记在制备棉花品种纤维色泽早期选择或品种鉴定中的用途。