[发明专利]分泌牛IL-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分泌牛IL-4单抗的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及其在免疫检测领域的应用。

背景技术

白细胞介素-4（IL-4）主要是由被有丝分裂原或特异性抗原刺激而活化的CD4⁺ Th2细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞等产生的一种多效性细胞因子，具有免疫调节功能以及抗肿瘤活性，在抗胞外寄生虫等感染中发挥重要作用。研究表明内源性IL-4水平的高低在很大程度上可以反映机体的体液免疫状态，而抗原特异性的IL-4反应则可以作为机体针对某种特定外来抗原的体液免疫状态的指标。

IL-4的免疫学检测是在特异性抗IL-4 单克隆抗体（McAb）的基础上建立的用于对样本中的IL-4进行定性定量分析的实验方法。应用不同的单抗标记物和检测技术，已经开发出多种方法，如酶免疫分析法（EIA），酶联免疫吸附法（ELISA），酶联免疫斑点法（ELISPOT），流式细胞术（FCM）分析法等。

酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）和酶联免疫斑点试验（Enzyme-linked Immunospot，简称ELISPOT）技术具有高度的敏感性和应用广泛性，已成为近年来最吸引人的免疫检测方法之一，在疫苗的研发、临床诊断以及基础研究等方面得到广泛应用。与传统的用于IL-4检测的刺激B细胞增殖活性分析方法相比，建立在免疫反应基础上的IL-4检测方法的灵敏度和特异性更高，作为体液免疫状态的重要指标，IL-4的双抗体夹心ELISA和ELISPOT检测方法将被广泛地用于研究基础和临床免疫学、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞外病原感染的诊断等。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌牛IL-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测领域的应用。

本发明一方面提供了一种分泌牛IL-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC NO：C201380。

该菌株已于2013年6月8日在中国典型培养物保藏中心（地址：湖北省武汉市武汉大学）注册保藏，保藏号为CCTCC NO：C201380，分类命名为：杂交瘤细胞株8B7。

本发明第二方面提供了一种牛IL-4单克隆抗体，由保藏号为CCTCC NO：C201380的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

本发明第三方面提供了前述分泌牛IL-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株及前述牛IL-4单克隆抗体在制备牛机体免疫状态的检测试剂中的应用。

本发明第四方面提供了一种牛IL-4的双抗体夹心ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包括：

1. 选自以下任一：

1）酶标板和捕获抗体； 

2）包被有捕获抗体的酶标板；

所述捕获抗体为杂交瘤细胞株CCTCC NO：C201380或其传代细胞株分泌产生。

2. 生物素标记牛IL-4单克隆抗体；

所述试剂盒中，酶标板可以事先包被有捕获抗体，也可以只提供空白酶标板与捕获抗体，在检测前由操作者自行采用常规方法在酶标板上包被捕获抗体。

所述酶标板可为各种常见规格的酶标板，如96孔酶标板。

所述生物素标记牛IL-4单克隆抗体中的牛IL-4单克隆抗体不同于前述捕获抗体。生物素标记牛IL-4单克隆抗体的方法采用常规。

进一步优选的，所述生物素标记牛IL-4单克隆抗体中的牛IL-4单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO：C201379的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

保藏号为CCTCC NO：C201379的杂交瘤细胞株已于2013年6月8日在中国典型培养物保藏中心（地址：湖北省武汉市武汉大学）注册保藏，分类命名为：杂交瘤细胞株4A10。

进一步的，所述试剂盒中还包括下列试剂中的一种或多种：

1）亲和素-辣根过氧化物酶结合物；

2）底物液；

3）洗涤液。

上述试剂均为ELISA检测中的通用试剂，不受具体检测项目的限制，因此即可根据需要有选择地加入试剂盒，也可由操作者自行配置或者单独购买。为方便操作者，最优的选择是试剂盒中同时包括亲和素-辣根过氧化物酶结合物、底物液和洗涤液。

所述底物液可为ELISA检测试剂盒中常用的通用底物液，如3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）底物液。