[发明专利]猴肾病毒40大T基因转染构建染色体易位细胞模型及其细胞库

说明书

技术领域

本发明涉及猴肾病毒40大T基因(SV40LT抗原基因或SV40LT)介导(转染)染色体易位细胞模型及其细胞库的构建，主要用于医学细胞遗传学研究领域，为染色体易位的研究提供细胞模型并保存其科研资源。

背景技术

染色体易位是染色体畸变的一种，一般指一条或数条染色体的一部份或整体转移到另一条或数条染色体上，或指一条或数条染色体的一部份与另外一条或数条染色体的一部份发生互换。通常分为丢失遗传物质的不平衡易位和不丢失遗传物质的平衡易位。不平衡染色体易位的个体自身表现出相应的染色体病临床症状，平衡染色体易位的个体自身表现为“正常”，但在生育子代时易发生流产、死胎、不育，或生育相应染色体病的子代。染色体病是目前无法治疗的疾病，是先天性出生缺陷之一，一旦出生，就会给社会和家庭造成严重的心理负担和精神痛苦，严重影响我国的人口质量。

近年来有国外文献报道，染色体易位是因为在细胞分裂前负责检验DNA损伤的机制不能严密运作所致。一些癌症的早期也会出现染色体易位现象。以往的研究证实，慢性骨髓性白血病、前列腺癌等发病都与染色体易位有关。为何细胞在没有排除染色体易位的情况下仍然继续分裂?有报道推测，可能是在细胞分裂前负责检验DNA损伤的机制出错，导致质量不合格的染色体得以“蒙混过关”，结果造成了染色体易位。有学者利用这种检验机制对不能严密运作的人体细胞进行了实验，向这些细胞中添加能切断DNA的药剂。实验结果显示，这些细胞在DNA未经修复的情况下依然继续分裂。实验还发现，即使是极微小的DNA损伤，都能引起染色体易位。研究结果还揭示了染色体发生易位与环境、遗传等多方面因素有关。

但是，由于没有可在体外长期培养的、可用于发病机制研究的永生细胞模型及其细胞库，就难以从细胞水平在体外研究染色体易位细胞受物理、化学、生物、遗传等影响的基因突变、基因表达、功能改变、生理特性、生物传导等机制，从而严重限制了染色体易位的进一步研究。

国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poul in DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型，可以用于转基因动物模型及人类和动物某些种类的细胞模型的建立，据此可以借助于研究转基因永生化细胞及动物模型而在体外研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制。

根据文献报道，Reilly用猿猴病毒(SV40)大T抗原基因转化来建立血管平滑肌细胞株，构建细胞模型以研究肝素对血管平滑肌的抑制作用机制。Su等利用经SV40转化的角化上皮细胞株，构建细胞模型来分析上皮细胞内蛋白质合成的调控作用。Miquel等用SV40转化的角化上皮细胞株，作为细胞模型研究层粘连蛋白5介导的细胞粘附作用。Webber等用经SV40转化的前列腺上皮细胞株作为细胞模型来研究前列腺上皮细胞的生理功能和分泌功能。Racusen等用经Ad12-SV40转化肾小管上皮细胞模型来研究近曲小管的损伤和疾病。Hougton等用SV40转化建立骨髓基质细胞株作为细胞模型以研究在一定培养条件下，细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞的双向分化的潜能，进一步研究骨质疏松的机制。

因研究工作的需要，几乎每种疾病都建立了各自的细胞模型。如糖尿病细胞模型、癌细胞细胞模型、转基因细胞模型、绝经期综合症细胞模型、子宫内膜细胞模型、癫痫细胞模型、电子细胞模型、酒精性痴呆细胞模型、脑水肿细胞模型。等等。

但是，至今尚未见有关构建可用于在体外从细胞水平研究染色体易位与环境等关联因素所致的发病机制的永生细胞模型及其细胞库的文献报道，也无法开展相关的研究项目。为了解决上述问题，本发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的目的是要提供以SV40LT抗原基因介导染色体易位细胞模型及其细胞库的构建方法，另一目的是为在体外从细胞水平研究染色体易位的发病机制提供SV40LT抗原基因介导染色体易位细胞模型及其细胞库。