[发明专利]一种抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法

权利要求书

1.一种抗禽流感病毒的樟芝菌丝体粗多糖的制备方法，其特征是，所述樟芝菌丝体粗多糖由下述方法制得：

(1)加热提取：取经液体发酵或固体发酵的樟芝菌丝体放于容器内，加入10-20倍的蒸馏水或纯净水，调整其pH值为8～12，置60～120℃下加热100～240分钟，趁热过滤，滤渣再加入10倍的蒸馏水，重复上述步骤再次加热提取，然后过滤，将两次滤液合并；

(2)减压浓缩：取合并的滤液，在温度50～70℃，压力0.2～0.6Kg/cm²，真空度为0.02～0.06Mpa的条件下进行减压浓缩，使滤液浓缩至原有体积的1/10～1/20；

(3)除色素：取浓缩后的提取液，用氨水调pH至6.0～8.0，于30～45℃下搅拌，按每10ml滴加1ml～2ml 10 %～30%的H₂O₂，进行脱色10～24h，得到淡黄色液体， 

(4)除小分子化合物：然后利用透析袋，截留分子量3000～5000以上，4℃～10℃条件下透析24h～48h，去除多余的H₂O₂、小分子化合物；

(5)除脂肪：取上述提取液，装入索氏提取器,石油醚加热回流提取2～6h,待冷却后，弃去石油醚层，回收余下的提取液；

(6)醇析：在回收的提取液中，加入量为其体积4～8倍的醇溶液并不断搅拌，搅拌速度为30～60r/min，10～20分钟后，静置24～48小时进行醇析；

(7)离心分离：醇析后弃上清液，沉淀物移入离心管中，以转速为3000～5000r/min离心20～30min，离心后弃去上清液，收集离心沉淀物；

(8)收集物干燥：将上述收集的离心沉淀物，在50～70℃温度条件下干燥36～48小时； 

(9)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，进行粉碎，经200目筛网过筛后即为樟芝菌丝体粗多糖；

步骤 所述的樟芝菌丝体是指樟芝（Antrodia camphorata）菌株液体发酵和固体发酵所得的菌丝体。

2.如权利要求1所述的抗禽流感病毒的樟芝菌丝体粗多糖的制备方法，其特征在于所述樟芝液体发酵或固体发酵经分离获得樟芝发酵菌丝体。

3.如权利要求1或2所述的抗禽流感病毒的樟芝菌丝体粗多糖的制备方法，其特征在于，所述樟芝液体发酵通过以下步骤进行：

（1）液体种子培养：采用500毫升三角瓶，每瓶装200毫升液体培养基，将10%的樟芝菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，调节pH为3-8，培养温度为20-35℃，摇瓶转速为80-280r/min，培养7-15天，即可得到樟芝液体种子；

（2）发酵罐发酵：先将发酵罐中的培养基进行灭菌，灭菌压力为0.1～0.2公斤/平方厘米，灭菌时间为1-2小时；当樟芝液体种子pH值降至2.5-4时，将摇瓶中的樟芝种子接种到50L发酵罐的培养液中，调整pH为5-8，培养温度25-35℃，通气量0.5-1.1vvm，搅拌转速100-250r/min，培养7-30天，即可获得樟芝发酵全液，经过滤得到菌丝体。

4.如权利要求3所述的抗禽流感病毒的樟芝菌丝体粗多糖的制备方法，其特征在于，所述液体种子培养基或发酵培养基配方以克/100毫升计是：

地瓜淀粉     1～3%                 葡萄糖          1～5%

蛋白胨       0.2～0.6%             酵母膏        0.2～0.5%

硫酸镁       0.1～0.3%             磷酸二氢钾   0.05～0.1%。

5.如权利要求1或2所述的抗禽流感病毒的樟芝菌丝体粗多糖的制备方法，其特征在于，所述樟芝固体发酵通过以下步骤进行：

将樟芝液体菌种接种至事先制备的固体培养基的菌包中，其含水量约为65%， 15×30 cm菌袋，每袋重150 g～1050 g，pH自然，培养温度25℃～27℃、空气相对湿度50%～70%、黑暗培养100 d ～160 d，待菌包表面全部呈桔红色后，开包取出菌丝体，粉碎后进行提取；

所述固体培养基配方以百分含量计是：

玉米芯40%，     樟木屑40%，       麸皮15%，

乳糖3%，        磷酸二氢钾1%，    硫酸镁1%。