[发明专利]抗体的制备方法

说明书

本申请是2008年10月14日提交的200880106430.4号发明专利申请“抗体的制备方法”的分案申请。

【技术领域】

本发明涉及抗体的制备方法。

【背景技术】

使用DNA重组技术，生产可作为药物使用的重组抗体时，如果使用动物细胞，可以实现复杂翻译后的修饰及折叠，这些是使用原核细胞所不能做到的，所以动物细胞作为生产重组抗体的宿主细胞被广泛应用。

近年来，抗体、生物活性蛋白等生物类药物大量问世。尤其是抗体药物通常每次的施用量都在mg级，因此这就需要抗体中含有足够量的活性成分。而这种使动物细胞高效生产重组抗体的技术，关系着抗体药物的低成本化，且是向患者稳定供应抗体药物的保证。

因此希望有更高效制备重组抗体的方法。

在制备用来产生重组抗体的宿主细胞的时候，通常是将编码该抗体H链的DNA和编码L链的DNA各一拷贝导入到宿主细胞中（非专利文献1、2）。

非专利文献1：Reff ME,Carner K,Chambers KS,Chinn PC,Leonard JE,Raab R et al.Depletion of B cells in vivo by a chimeric mouse human monoclonal antibody to CD20.Blood.1994Jan15;83(2):435-45.

非专利文献2：Presta LG,Chen H,O’Connor SJ,Chisholm V,Meng YG,Krummen L,et al.Humanization of an anti-vascular endothelial growth factor monoclonal antibody for the therapy of solid tumors and other disorders.Cancer Res.1997Oct 15;57(20):4593-9.

【发明内容】

【发明拟解决的技术课题】

另一方面，对于导入了一拷贝编码所欲重组抗体H链的DNA和2拷贝以上编码L链的DNA的稳定转化的表达细胞是否有助于提高所欲重组抗体的产生，目前尚无法得知。

所以本发明的目的是提供一种高效生产抗体的方法。

【解决课题的技术方案】

本发明的发明者们，为了解决上述课题经过不懈努力，发现当使用所含编码抗体L链的外源DNA的拷贝数比编码H链的外源DNA的拷贝数多的细胞，可以提高抗体的产量，从而完成本发明。

本发明的要点如下所述。

（1）制备抗体或其片段的方法，包括：使用所含编码抗体L链或其片段的外源DNA的拷贝数比编码抗体H链或其片段的外源DNA的拷贝数多的细胞来产生抗体或其片段。

（2）（1）的方法，其中所述所含编码抗体L链或其片段的外源DNA的拷贝数比编码抗体H链或其片段的外源DNA的拷贝数多的细胞是导入以下载体的细胞，所述载体含1拷贝编码抗体H链或其片段的DNA和2拷贝以上编码抗体L链或其片段的DNA。

（3）（2）的方法，其中所述细胞是动物细胞。

（4）（3）的方法，其中所述动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。

（5）（1）～（4）中任一项的方法，其中所述抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

（6）（1）～（5）中任一项的方法，其中所述抗体选自：抗IL-6受体抗体、抗IL-6抗体、抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体、抗CD3抗体、抗CD20抗体、抗GPIIb/IIIa抗体、抗TNF抗体、抗CD25抗体、抗EGFR抗体、抗Her2/neu抗体、抗RSV抗体、抗CD33抗体、抗CD52抗体、抗IgE抗体、抗CD11a抗体、抗VEGF抗体及抗VLA4抗体。

（7）制备药物的方法，该药物包含通过（1）～（6）中任一项的方法制备出的抗体或其片段。

（8）重组载体，其含有1拷贝编码抗体H链或其片段的外源DNA和2拷贝以上编码抗体L链或其片段的外源DNA。

（9）细胞，其中导入有（8）的载体。

（10）培养的细胞，其中所含编码抗体L链或其片段的外源DNA的拷贝数比编码抗体H链或其片段的外源DNA的拷贝数多。

（11）制备抗体或其片段的方法，包括：使用以下细胞来产生抗体或其片段，所述细胞的特征是：与抗体H链或其片段相比，高表达抗体L链或其片段。