[发明专利]一种发酵生产L-丙氨酸的高产菌株及其制备方法

权利要求书

1.一种发酵生产L-丙氨酸的高产菌株Lds.0108菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏号为：CCTCC NO: M 2013361。

2.一种如权利要求1所述的高产菌株制备方法，其特征在于，所述的方法包括：以乳酸产生菌德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）为出发菌株，活化出发菌→低能离子注入法诱变处理细胞→可逆抑制测定法筛选生产L-丙氨酸的高产菌株。

3.根据权利要求2所述的高产菌株对制备方法，其特征在于，所述的活化出发菌，包括：将出发菌德氏乳杆菌保加利亚亚种在斜面培养基上42℃培养至对数生长期，用0.85 %的生理盐水制成菌悬液，1mL菌悬液含菌数约为10⁷，镜检菌种健壮且无杂菌后，吸取0.1mL菌悬液均匀涂布于无菌空白培养皿上，无菌风吹干制成菌膜，镜检无细胞重叠后，进行下一步。

4.根据权利要求2所述的高产菌株对制备方法，其特征在于，所述的低能离子注入诱变法诱变处理细胞：真空条件下注入的离子为N离子，剂量为1.5×10¹⁴-5×10¹⁶ ions/cm²，能量为15-20keV，脉冲注入，每次注入5s，间隔时间15-40s，注入后用0.5-1mL无菌生理盐水洗下菌体细胞。

5.根据权利要求2所述的高产菌株对制备方法，其特征在于，所述的可逆抑制测定法筛选生产L-丙氨酸的突变株：挑选离子注入后的单菌落进行编号，并接种到对应编号的发酵培养基中发酵培养；将所得的发酵液除去菌体后高温灭菌，加入1.5%琼脂和0.01-0.05%抑制剂，灭菌后倒平板，并涂布指示菌，置于35-40 ℃培养箱中进行培养；选取指示菌生长的平板所对应的编号的突变菌株进行连续传代培养，通过稳定性试验，最终得到1株编号为Lds.0108的L-丙氨酸高产菌株。

6.一种发酵生产L-丙氨酸的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的保藏号为：CCTCC NO: M 2013361的德氏乳杆菌突变株 Lds.0108来生产发酵。

7.根据权利要求6所述的一种发酵生产L-丙氨酸的制备方法，具体步骤包括：

（1）、扩增培养种子液：保藏号为：CCTCC NO: M 2013361的德氏乳杆菌突变菌株Lds.0108来生产发酵通过斜面培养和种子罐扩培养，培养温度37℃，斜面培养时间24h，种子罐培养时间18h；

（2）、厌氧发酵生产L-丙氨酸：将扩增后的种子液接种到发酵培养基中，底物葡萄糖浓度为6-12%，发酵温度为35-40℃，培养基pH值为6.5-7.5，维持厌氧环境，待残糖浓度小于0.1%则发酵完成，发酵时间30-52h；

（3）、发酵液净化处理：先采用陶瓷超滤膜或有机管式超滤膜过滤，然后通过纳滤膜进一步过滤；

（4）、制得成品：纳滤液经过真空浓缩蒸发去水分，结晶析出L-丙氨酸，经离心分离，干燥得成品。