[发明专利]一种高抗TuMV的RNA和编码该RNA的RNAi载体

说明书

技术领域

本发明属于植物抗病毒基因工程领域，具体涉及一种高抗TuMV的RNA和编码该RNA的RNAi载体。

背景技术

芜菁花叶病毒（Turnip Mosaic Virus，TuMV）属马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus）。TuMV寄主范围十分广泛,能够侵染43科156属超过318种植物。TuMV是十字花科作物中危害最大的病毒病。感染病毒后的作物还容易感染霜霉病和软腐病，造成复合侵染,直接影响到产量和商品价值。

油菜是我国最主要的油料作物。芜菁花叶病毒病是油菜的重要病害之一。近年来，在我国油菜主产区病毒病发生有日益流行加重趋势。据调查发病田块发病率一般为20%～30%，重的发病率在50%以上，造成油菜籽产量的重大损失。感病油菜不仅产量降低，而且产油率和种子萌芽率也明显降低，品质下降。此外，我国白菜因该病毒危害平均每年造成5%的产量损失,有些年份减产10%以上,病害严重的地块几乎绝收。

TuMV主要是靠蚜虫以非持久性的方式传播,据报道目前至少有89种蚜虫可传播,而采用杀虫剂不可能很快杀死全部的蚜虫以阻止病毒的传播，仅靠杀虫剂杀蚜防治病毒病的效果不明显，还易造成环境污染。因此寻求新的抗病方法成为了一项迫切的任务。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种高抗芜菁花叶病毒（Turnip Mosaic Virus，TuMV）的RNA和编码该RNA的RNAi载体。

本发明提供的一种RNA，具有下述核苷酸序列之一：

1）序列表中的SEQ ID№.2所示的核苷酸序列；

2）与1）限定的RNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的RNA序列；具体的，所述同源性为95%以上；再具体的为96%以上；再具体的为97%以上；再具体的为98%以上；再具体的为99%以上。

所述具有相同功能具体指具有下述任一功能：

1）增强植物对TuMV的抗性；

2）增强植物对草铵膦除草剂的抗性。

所述植物具体为拟南芥或十字花科作物；所述十字花科作物具体为油菜或白菜。

所述TuMV具体为TuMV-C4和/或BJ-R01。

所述RNA的编码基因也属于本发明的保护范围。

含有所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌也属于本发明的保护范围。

所述重组载体具体为重组表达载体或重组克隆载体。

所述重组表达载体为将DNA片段插入出发载体的多克隆位点中得到的；所述DNA片段为X正向—连接区—X反向；X正向为SEQ ID No.1中第15-467位核苷酸所示，X反向为X正向的反向互补片段。

具体的，所述出发载体为pBBBast。

所述的重组表达载体中，所述X正向—连接区—X反向片段具有序列表中SEQ ID №.3中第1371-3087位核苷酸所示的序列。

本发明的另一个目的是提供所述RNA、所述RNA的编码基因、所述含有所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌的如下至少一种应用：

1）制备抗TuMV的产品；

2）增强植物对TuMV的抗性；

3）增强植物对草铵膦除草剂的抗性。

所述应用中，所述植物具体为拟南芥或十字花科作物；所述十字花科作物具体为油菜或白菜。

所述应用中，所述TuMV具体为TuMV-C4和/或BJ-R01。

本发明的再一个目的是提供一种培育转基因植物的方法，是将所述的重组表达载体转入目的植物，得到转基因植物；所述转基因植物与所述目的植物相比，具有如下至少一种性状：1）对TuMV的抗性增强；2）对草铵膦除草剂的抗性增强。

所述方法中，所述TuMV具体为TuMV-C4和/或BJ-R01。

所述方法中，所述目的植物具体为拟南芥或十字花科作物；所述十字花科作物具体为油菜或白菜。

附图说明

图1为中间载体的酶切验证结果，其中M为分子量标记；泳道1为pHannibal+HC-Pro-RNAi载体的酶切结果；泳道2为连入反向片段pHannibal+HC-Pro(-)载体的酶切结果；泳道3为空pHannibal载体的酶切结果。

图2为载体pBBBTu-HC-Pro的结构示意图。