[发明专利]一种α1-AR亚型选择性拮抗剂的高通量筛选细胞模型及其构建方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物高通量筛选细胞模型的构建技术领域，具体涉及一种α₁-AR亚型选择性拮抗剂的高通量筛选细胞模型及其构建方法与应用。

背景技术

α₁-肾上腺素受体（AR）按克隆型可分为三个亚型（α_1A，α_1B和α_1D），在血管和非血管组织中广泛分布，分别或联合调节人的大部分生理功能反应。具有不同的调节功能。α_1A调节平滑肌收缩，控制排尿，有控制血压的作用；α_1D-AR与主动脉和冠状动脉血管收缩相关；近年来，α_1A被发现是引起膀胱出口阻滞的主要动态因素，拮抗α_1A可缓解尿路梗阻，而拮抗α_1D-AR可改善由良性前列腺增生（BPH）疾病导致的下尿路症状。而α_1B主要表达于血管床，参与调节血压，主要调节小阻力血管，收缩海绵体，保持血管状态，是有效缓解性功能勃起障碍的靶标。α_1B还被发现可控制运动和阿片类精神兴奋剂药物引起的药物成瘾症。

    良性前列腺增生症主要体现在两方面：1、前列腺腺体单纯性肥大,导致泌尿压迫和膀胱尿流阻滞；2、交感神经系统调节α₁肾上腺素受体（α₁-adrenegic receptor,α₁-AR）影响前列腺平滑肌和膀胱颈平滑肌造成不恰当收缩。通过调节α₁-AR缓解交感神经紧张是改善前列腺状况的一条重要途径。前列腺相关组织中分布以α_1A和α_1D为主，α_1B主要表达于血管床。其中，在前列腺和尿道平滑肌中主要表达为α_1A，尿道中，α_1A-AR和α_1D-AR分布分别为69.3%和27.3%，前列腺组织中分布分别为85%和15%，而膀胱中则主要表达为α_1D-AR。因此，设计治疗BPH药物考虑以拮抗α_1A和α_1D-AR为主，减少或避免对α_1B-AR的拮抗。以获得药物有效性和安全性。

    α₁-AR拮抗剂（代表性有terazosin, doxazosin, alfuzosin和tamsulosin等）, 可通过松弛尿道周围前列腺平滑肌来减轻膀胱出口阻滞，缓解下尿路症状。然而，囿于当今非选择性α₁-AR拮抗剂对α₁-AR三种亚型的普遍拮抗性，导致患者产生一系列心血管副作用包括体位性低血压、头晕、疲劳、虚弱乏力等。近年来研究成果逐渐显现出强化α₁-AR对各亚型拮抗细化分类的要求，包括：拮抗α_1A-AR亚型的SNAP-5089和Silodosin；拮抗α_1B-AR亚型的（+）-胞磷胆碱和L-765314；拮抗α_1D-AR亚型的BMY-7378等，其亚型选择性各有不同。在治疗BPH的临床用药中，亚型选择性拮抗剂类药物逐渐趋向明确对α_1A和α_1D的拮抗，减低对α_1B拮抗。因此，如何明确药物对α₁-AR亚型的拮抗选择性，成为目前治疗良性前列腺增生药物的研发关键之一。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中潜在抗良性前列腺增生类药物筛选技术效果不好的缺陷，提供一种高通量筛选抗良性前列腺增生药物的筛选方法。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

一种α₁-AR亚型选择性拮抗剂高通量筛选细胞模型，将α₁-AR三种亚型α_1A、α_1B和α_1D的真核表达质粒、报告基因和内参质粒共转染宿主细胞，建立瞬转细胞模型；所述报告基因采用G蛋白偶联受体的响应元件CRE，NFAT-RE， SRE，AP-1或NF-кB中的任意一种与荧光素酶、β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶报告基因中的任意一种共同构建同于一个载体上制备得到；所述内参质粒为pRL-SV40，pRL-TK，pRL-CMV，pRL-null，或pGL4-系列的一种。