[发明专利]一种玫烟色棒束孢菌菌株的分离及培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种菌株的分离及培养方法，特别是涉及一种玫烟色棒束孢菌菌株的分离及培养方法。 

背景技术

玫烟色棒束孢是一种重要的虫生真菌，分布广泛，能寄生同翅目、半翅目、双翅目、鞘翅目和膜翅目等多种有害昆虫，我们在田间分离到了一株玫烟色棒束孢菌株，命名为IF-1106，我们对玫烟色棒束孢的生物学特性进行研究，有助于为该菌的大量生产提供理论依据。在进行生物学特性测定过程中，发现传统的用打孔器取菌饼接种的方法，会使孢子弹射，菌落生长不规则，无法测定菌落直径。因此，需要寻找一种合适的培养方法，避免孢子弹射，使菌落生长规则，能合理准确的进行菌落形态特征描述及菌落直径测定，明确菌的培养方法。 

发明内容

本发明目的在于提供一种玫烟色棒束孢菌菌株的分离方法。 

本发明的另一目的在于提供一种玫烟色棒束孢菌菌株的培养方法。 

本发明是通过如下技术方案实现的： 

一种玫烟色棒束孢菌，其菌株为IF-1106，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2013年4月23日，保藏编号：CGMCCNo.7514，分类命名：玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea。 

本发明玫烟色棒束孢菌菌株的分离方法为，首先从温室蔬菜叶上采集到被虫生真菌侵染的烟粉虱Bemisia tabaci虫尸3-7头，从采回的被虫生真菌侵染的烟粉虱虫尸上分离病原菌；先利用3%的次氯酸钠溶液对采集的烟粉虱虫尸进行表面消毒，然后用经110-130℃灭菌10-30min后的去离子水5-15ml冲洗2-4次，放入马铃薯葡萄糖培养基（PDA）或马铃薯蔗糖培养基（PSA）上，倒置于20-30℃霉菌培养箱（培养箱的型号为MJ-250F-1霉菌培养箱，由上海一恒科学仪器有限公司生产）中培养，待有菌丝形成后，挑取形成后的菌丝在马铃薯葡萄糖培养基（PDA）或马铃薯蔗糖培养基（PSA）上培养， 8-12d后马铃薯葡萄糖培养基（PDA）或马铃薯蔗糖培养基（PSA）上的菌丝逐渐形成致密绒毛状白色菌落，背面呈浅黄褐色，这时分生孢子在菌丝端部或侧枝上生长，则分生孢子形成，挑取菌丝放入盛有5-15ml0.1%的吐温-80的无菌水的小烧杯中，用磁力搅拌器（磁力搅拌器型号为RH basic KT/C，由IKA公司生产）进行搅拌，分生孢子会从菌丝上脱落，用3-5层无菌纱布进行过滤，将菌丝过滤掉，分生孢子会在吐温-80中形成孢子悬浮液，这时再用血球计数板计数，制成1.0×10⁷分生孢子/ml的孢子悬浮液，将此孢子悬浮液喷于带有40-60头烟粉虱2龄若虫（2龄若虫的形态特征为：椭圆形，扁平，灰白色，稍透明，体长0.3-0.5mm）的蔬菜叶上，放入湿度为80-100%，温度为20-30℃的人工气候箱（人工气候箱的型号为PRX-450C智能人工气候箱，由宁波海曙赛福仪器厂生产）中培养4-6d后烟粉虱若虫上会布满白色菌丝，即可确定培养后虫生真菌与采集到的烟粉虱若虫生真菌是同一种虫生真菌，证明分离到的虫生真菌的确是烟粉虱的虫生真菌，将该虫生真菌保存在试管斜面上，保存于3-5℃冰箱中。