[发明专利]一种可诱导表达的疏螺旋体穿梭表达工具载体及构建方法和应用

权利要求书

1.一种人工合成的疏螺旋体穿梭表达工具载体，其序列为SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述载体的构建方法，其步骤为：

（1）合成4条单链核苷酸DNA片段，序列分别为：

FLAG-HA-Tag1：TATGGATTATAAAGATGATGATGATAAAGCCATGGCTGCAGA GCTCGTCGACCG；

FLAG-HA-Tag2：GAGCTCTGCAGCCATGGCTTTATCATCATCATCTTTATAATCC A；

FLAG-HA-Tag3：CGGCGGCCGCCTCGAGTATCCTTATGATGTACCTGATTATGCT TA；

FLAG-HA-Tag4：AGCTTAAGCATAATCAGGTACATCATAAGGATACTCGAGGCG GCCGCCGCGGTCGAC；

其中tag1和tag2、tag3和tag4含有互补序列，下划线表示，tag1和tag4末端互补，tag1和tag4的5’端磷酸化；

（2）用水溶解4条DNA片段至50μM，等体积混合，95℃处理10-30分钟，然后自然冷却至20-30℃并作用8-16小时，以褪火生成局部双链，其5’和3’端分别为NdeI和HindIII的酶切后粘端；然后用NdeI和HindIII酶切质粒pJSB275，将获得的部分双链DNA连接克隆到pJSB275质粒中，转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，提取质粒即为获得的目的工具载体，其序列为SEQ ID NO.1所示。

3.权利要求1所述的载体在疏螺旋体基因功能研究中的应用。