[发明专利]几丁质结合蛋白CBP21及其编码基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及几丁质结合蛋白CBP21及其编码基因和应用。

背景技术

几丁质又名甲壳素、几丁聚糖，是N-乙酰-β-D-葡萄糖胺（N-Acetyl-β-D-Glucosamine，简称GlcNAc）以β-1,4糖苷键连接起来的直链多聚物，是一种类似于植物纤维的六碳糖聚合体。其广泛存在于低等植物、菌类、藻类、节肢动物（虾、蟹）及昆虫的外壳和软骨、高等植物的细胞壁等，是自然界中仅次于纤维素的第二大天然生物有机资源，年生物合成量达100亿吨。

几丁质酶（EC.3.2.14）能将几丁质β-1,4糖苷键水解，最终分解为N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）。根据作用方式和酶解产物，将其分为内切几丁质酶、外切几丁质酶和几丁二糖酶。内切几丁质酶从几丁质链的任一部位切割，产生几丁质寡聚糖，如(GlcNAc)₂、(GlcNAc)₃等。外切几丁质酶又称N-乙酰-β-D-葡萄糖胺酶，此酶从几丁质寡糖或几丁质链的非还原末端依次切下N-乙酰-β-葡萄糖单体。几丁二糖酶则是专一性地将几丁二糖降解为几丁单糖。

发明内容

本发明的目的是提供几丁质结合蛋白CBP21及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，命名为CBP21蛋白，获自粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens），为如下（a）或（b）或（c）：（a）由序列表的序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）将（a）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与几丁质结合的特性的由其衍生的蛋白质；（c）将（a）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有促进几丁质酶酶活功能的由其衍生的蛋白质。

本发明还保护具有所述CBP21蛋白的融合蛋白。所述融合蛋白为如下（d）或（e）或（f）：（d）由序列表的序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（e）将（d）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有与几丁质结合的特性的由其衍生的蛋白质；（f）将（d）经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有促进几丁质酶酶活功能的由其衍生的蛋白质。

编码所述CBP21蛋白的基因也属于本发明的保护范围。编码所述CBP21蛋白的基因可为如下（1）或（2）或（3）或（4）或（5）或（6）所述的DNA分子：（1）序列表的序列2自5’末端第1至519位核苷酸所示的DNA分子；（2）序列表的序列2所示的DNA分子；（3）在严格条件下与（1）或（2）限定的DNA序列杂交且编码具有与几丁质结合的特性的蛋白的DNA分子；（4）与（1）或（2）限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且编码具有与几丁质结合的特性的蛋白的DNA分子；（5）在严格条件下与（1）或（2）限定的DNA序列杂交且编码具有促进几丁质酶酶活功能的蛋白的DNA分子；（6）与（1）或（2）限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且编码具有促进几丁质酶酶活功能的蛋白的DNA分子。上述严格条件可为在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC、0.1%SDS和1×SSC、0.1%SDS各洗膜一次。

编码所述融合蛋白的基因也属于本发明的保护范围。编码所述融合蛋白的基因可为如下（7）或（8）或（9）或（10）或（11）或（12）所述的DNA分子：（7）序列表的序列4自5’末端第1至660位核苷酸所示的DNA分子；（8）序列表的序列4所示的DNA分子；（9）在严格条件下与（7）或（8）限定的DNA序列杂交且编码具有与几丁质结合的特性的蛋白的DNA分子；（10）与（7）或（8）限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且编码具有与几丁质结合的特性的蛋白的DNA分子；（11）在严格条件下与（7）或（8）限定的DNA序列杂交且编码具有促进几丁质酶酶活功能的蛋白的DNA分子；（12）与（7）或（8）限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且编码具有促进几丁质酶酶活功能的蛋白的DNA分子。上述严格条件可为在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC、0.1%SDS和1×SSC、0.1%SDS各洗膜一次。

含有所述基因的表达盒、重组载体、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。