[发明专利]富铁水稻快速筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及水稻籽粒含铁量的快速筛选方法，主要涉及领域为：农学、育种、水稻。

背景技术

水稻是世界第二大粮食作物，也是我国的主要粮食作物，其营养成分直接关系到人们的身体健康。铁元素是人体生长发育所必需的微量元素，在人体分布很广，缺铁会降低婴儿的心智发育，降低免疫力，增加母婴的死亡率，还会增加人体疲劳感，使工作效率低下。WHO（2004）报道缺铁是世界普遍存在的营养问题。世界上约有40~50亿人（占世界人口的66~80% ）均存在铁缺乏，其中20亿的贫血症患者是由于铁缺乏所引起的，发展中国家的情况尤为严重。因此，研究稻米的矿质营养、充分发掘富含铁元素的水稻种质及培育新品种有利于解决这一营养危机。稻米中微量元素含量的研究难度之一是如何快速和准确地测定其微量元素含量水平。因此，微量营养成分的测定方法应实现规范化、标准化，并与国际测定方法保持一致，对品种区域试验和检测技术、审（认）定标准、指标以及品种推广利用途径等进行深入、系统研究极为必要。目前稻米中矿物质含量的测定方法一般都需要高昂的仪器并且需要繁琐的样品前处理程序，其中的样品灰化过程一般需要24-36h的时间，而且常规的灰化炉一次只能放36-48个样品，灰化样品少、灰化时间长，接下来用元素测定仪或ICP-MS等方法测定成本高且耗时长，不能快速、高效地测定出稻米的矿物质含量，因而不能及时有效地为育种工作服务。在育种实践过程中并不需要极其精确地得到水稻籽粒的铁含量水平，而只要相对准确地对富铁水稻材料加以快速筛选就可以达到育种要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题为富铁水稻的育种工作提供一种快速、经济和准确的富铁水稻快速筛选方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种富铁水稻快速筛选方法，待测水稻为以标准品水稻为基础进行突变或改良所得的水稻，将待测水稻籽粒和标准品水稻籽粒分别进行如下步骤1）~步骤4）：

1）、籽粒糊化：

在4粒水稻籽粒中加入质量浓度为4%的NaOH溶液0.8~1.2 mL，在恒温培养箱中于34.5~35.5℃糊化5.5~6.5h，取出后于振荡器上震荡1.5~2.5min，振荡频率为300~350r/min；

2）、在步骤1）的所得物中加入0.4~0.6 mL 浓度为2M的盐酸进行中和；

3）、在步骤2）的所得物中加入质量浓度为10%的氯化羟胺水溶液0.2~0.3mL、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.5）0.7~0.8 mL、质量浓度为20%的乳化剂OP水溶液0.9~1.1mL；然后用浓度为5M的NaOH溶液调节pH为4.0~5.0，振荡摇匀后静止8~12min；

备注说明：乳化剂OP具体可选用乳化剂OP-10；

4）、在步骤3）的所得物中加入0.2~0.3mL的4,7-二苯基1,10-邻菲罗啉（BPT）染色液，振荡摇匀后静止8~12min；取位于上层的清液（备注说明：静止后会出现分层，未溶解的部分沉淀下来，本发明对上层的清液进行颜色比较）；从而分别获得待测水稻籽粒的反应物和标准品水稻籽粒的反应物；

所述BPT染色液为BPT的质量浓度为0.1%的乙醇溶液；

5）、将步骤4）所得的待测水稻籽粒的反应物和标准品水稻籽粒的反应物进行颜色的比较；

如果待测水稻籽粒的反应物的颜色比标准品水稻籽粒的反应物颜色深，则说明待测水稻籽粒的含铁量高于标准品水稻，即，待测水稻为富铁水稻。

备注说明：浓度M即mol/L的意思。

作为本发明的水稻籽粒含铁量的快速筛选方法的改进：

所述步骤1）中：NaOH溶液的用量为1mL，在恒温培养箱中于35℃糊化6h，取出后于振荡器上震荡2min；

所述步骤2）中盐酸的用量为0.5 mL；

所述步骤3）中氯化羟胺水溶液的用量为0.25mL，乙酸-乙酸钠缓冲液的用量为0.75 mL，乳化剂OP水溶液的用量为1mL；

所述步骤4）中BPT染色液的用量为0.25mL。

在本发明中，

水稻籽粒选择大小基本一致的成熟籽粒（经常规的脱壳处理）；

质量浓度为10%的氯化羟胺水溶液，临用前配制。

BPT染色液，需4℃避光保存。

振荡频率一般均指300~350r/min。

本发明的富铁水稻快速筛选方法，4个步骤总计时间仅约为6.5小时。

备注说明：