[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201310375408.2 | 申请日： | 2013-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN103627816A | 公开（公告）日： | 2014-03-12 |
| 发明（设计）人： | 刘永生;丁耀忠;张杰;周建华;陈豪泰;马丽娜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人： | 牟彩萍 |
| 地址： | 730000 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 繁殖 呼吸 综合征 病毒 多重 rt pcr 检测 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括有混合酶Enzyme Mix、2×Buffer 2、无菌双蒸水和两对引物，两对引物分别为用于扩增美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因的引物对一和用于扩增欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的目的基因的引物对二；
所述引物对一包括
上游引物：5′-CACCACGTCGAAAGTGCCGC-3′和
下游引物：5′-GACGCCGGACGACAAATGCG-3′；
所述引物对二包括
上游引物：5′-GGGGCTGTTGCACATCCTAA-3′和
下游引物：5′-ACAAAAGGGCAACAACAGCC-3′；
所述混合酶Enzyme Mix为2μl，2×Buffer为25μl，无菌双蒸水为50μl；
所述2×Buffer由Tris-盐酸、氯化钾、硫酸镁、硫酸铵、吐温-20和三磷酸脱氧核苷酸dNTPS组成。
2.根据权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述引物对一和引物对二的使用量分别为0.8μl，即引物对一中上下游引物各为0.8μl，引物对二中上下游引物各为0.8μl。
3.一种根据权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒在检测欧洲型和美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒的使用方法为：从待检动物的血液或病死动物的组织中提取其全基因组RNA，以RNA为模板，以试剂盒中的特异性欧洲型和美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒的引物进行多重RT-PCR，对得到的产物进行电泳，根据电泳图谱分析被检动物是否感染有欧洲型和美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒。
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