[发明专利]一种槲果素6的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药活性成分的制备方法，具体地是一种从埃及槲果种子中制备槲果素6的方法。

背景技术

槲果素6（Balanitin 6），是从槲果科(Balanitaceae) 埃及槲果 Balanites aegyptica Del.种子中分离出的一种甾体皂苷类化合物，分子式为C₄₅H₇₂O₁₇，分子量为885.05，结构式为

药理研究表明，槲果素6具有细胞抑制活性。对小鼠淋巴细胞白血病(P388)的ED50为0.21μg/mL。

目前，国内对槲果素6的研究较少，尚处于起步阶段。因此，研究出一种制备槲果素6的方法是非常必要的，对于扩大药源以及埃及槲果种子的综合利用具有很重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单，产品纯度较高的槲果素6制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

（1）超临界二氧化碳流体萃取埃及槲果种子中的油脂类物质，脱脂物用乙醇超声提取后得到提取液；

（2）提取液浓缩，2800-3100rpm下离心，得到初步纯化液；

（3）上大孔树脂纯化，水和乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩；

（4）浓缩液经制备型液相色谱分离，冷冻干燥即得槲果素6。

步骤（1）中所述超临界萃取温度为35-50℃，压力为25-30MPa，时间为30-60min。

步骤（1）中所述乙醇为60-80%的乙醇溶液溶液，用量为8-10倍量(V/W)。

步骤（1）中所述超声频率为65-80KHz，提取1-3次，每次0.5-1h。

步骤（3）中所述大孔树脂可选HPD-400或D101型，洗脱剂为70%的乙醇水溶液。

步骤（4）中所述制备液相色谱分离，以甲醇-乙腈-水为流动相，体积比为25:39:36，流速为35-50ml/min。

综上所述，本发明存在以下优点：本工艺采用超声波提取的方法提取槲果素6，提高了提取效率；60-80%的乙醇溶液作为提取溶剂，减少了多糖的溶出；采用大孔树脂分离槲果素6，成本低，分离效果好；制备液相色谱分离纯化，具有生产过程简单，易于实现工业化等优点。

下面将结合具体实施方式对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

埃及槲果种子粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为35℃，压力为25MPa下萃取30min，脱脂物加8L80%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为65KHz，提取3次，每次1h，过滤，合并提取液，低温浓缩，2800rpm下离心，得到初步纯化液，上1LHPD-400大孔树脂柱，吸附完成后，先用4L水洗脱，再用4L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为3.5ml/min，收集富含槲果素6的洗脱液，浓缩，将浓缩液加甲醇配制成澄清溶液，用制备型高效液相色谱分离，制备柱以C18为柱填料，以甲醇-乙腈-水为流动相，体积比为25:39:36，控制流速为25ml/min，收集目标流分，冷冻干燥即得槲果素61.68mg，含量为91.4%。

实施例2： 

埃及槲果种子粉碎，取1kg，放入超临界萃取装置中，在温度为45℃，压力为30MPa下萃取50min，脱脂物加10L70%的乙醇溶液进行超声提取，超声频率为65KHz，提取2次，每次1h，过滤，合并提取液，低温浓缩，3100rpm下离心，得到初步纯化液，上1LHPD-400大孔树脂柱，吸附完成后，先用5L水洗脱，再用5L70%乙醇溶液洗脱，控制流速为4.5ml/min，收集富含槲果素6的洗脱液，浓缩，将浓缩液加甲醇配制成澄清溶液，用制备型高效液相色谱分离，制备柱以C18为柱填料，以甲醇-乙腈-水为流动相，体积比为25:39:36，控制流速为35ml/min，收集目标流分，冷冻干燥即得槲果素50.88mg，含量为92.1%。

实施例3：