[发明专利]一种基于HPLC技术的石蒜中茉莉酸类化合物含量的检测方法

权利要求书

1.一种基于HPLC技术的石蒜中茉莉酸类化合物含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品的提取与纯化

取待测样品的新鲜植物叶10g，加入20～30ml体积浓度为80%的甲醇溶液，加入吸附剂，冰浴研磨成匀浆，离心后取上清旋转蒸发至水相；加入磷酸盐缓冲液，脱色后萃取，然后复溶，经Spe C18小柱纯化后，使用0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液；

（2）检测装置的设定

色谱柱为Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相A甲醇，B pH3.6的乙酸水溶液；等度洗脱A：B=1:1，流速为1mL/min，检测波长235nm，柱温为25℃，待基线平稳，进样量为10μL；

（3）标准曲线绘制

分别准确称取茉莉酸JA、二氢茉莉酸DJA、茉莉酸甲酯MeJA和二氢茉莉酸甲酯DMeJA的标准品，加入甲醇溶解，摇匀配制成质量浓度为1.0～1.2mg/ml的标准品溶液；分别取各标准品溶液，加甲醇逐级稀释，制得质量浓度分别为200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml的标准系列溶液；分别精密量取10μl进样于高效液相色谱仪，记录色谱图，分别以各标准品的含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线，横坐标标准品的含量在5～200微克/毫升，得到标准品茉莉酸、二氢茉莉酸、茉莉酸甲酯和二氢茉莉酸甲酯的保留时间RT分别为：茉莉酸RT为4.380min，二氢茉莉酸的RT为6.256min，茉莉酸甲酯的RT为8.603min，二氢茉莉酸甲酯的RT为13.196min；

（4）检测待测样品石蒜组织中的茉莉酸类含量

将石蒜样品经步骤（1）提取与纯化后按照步骤（2）和步骤（3）进行HPLC检测，进样10μl，积分同一保留时间下的峰面积，一次性检测得到待测石蒜样品中四个茉莉酸类激素及其含量。

2.根据权利要求1所述的一种基于HPLC技术的石蒜中茉莉酸类化合物含量的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中，取新鲜植物叶10g，加入20～30ml体积浓度为80%的甲醇溶液，4℃下静置过夜，加入交联聚乙烯基吡咯烷酮PVPP溶液，冰浴研磨成匀浆，离心后取上清旋转蒸发至水相；加入磷酸盐缓冲液，然后再加入等体积的石油醚脱色，保留水相，重复三次，当醚相无颜色时调节水相的pH至8.0，然后使用等体积的乙酸乙酯进行萃取，重复两次，合并酯相，旋转蒸发，浓缩至干，然后加入到1ml体积浓度为60%甲醇中复溶，经Spe C18小柱纯化后，使用0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液。