[发明专利]一种以柑橘幼子的落果为原料生产柠檬苦素类提取物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离纯化柑橘幼子落果中柠檬苦素类化合物的绿色化学工艺技术，尤指一种采用HP-20大孔吸附树脂分离纯化柑橘幼子落果中柠檬苦素类化合物的绿色方法。

背景技术

柑橘属芸香科柑橘属植物，为世界的第一大水果，2006年我国柑橘种植面积达171.4万hm²，年产量高达1900万吨，分居世界第1位和第2位。每年柑橘生产过程中会产生数以万吨计的落果，落果树可占到总小果树的60%-85%，但柑橘的落果资源很容易被人忽视。如果充分利用柑橘的落果，从中提取并分离纯化柠檬苦素类物质等活性成分，就能充分保证柑橘落果中有效成分的开发利用，并对有效保护环境和提高柑橘综合利用价值有重大意义。因此，从柑橘落果中提取这些活性物质，不仅能变废为宝，提高柑橘的生产价值，造福果农，对于我国柑橘产业的持续发展也具有积极地促进作用。

柠檬苦素类化合物为一类三萜类物质，是植物次生代谢产物，主要存在于芸香科和楝科等植物中，柑橘中的柠檬苦素类化合物是柑橘产生苦味的主要原因之一。自1989年发现柠檬苦素类物质具有激活谷胱甘肽S-转移酶活性的功能以来，人们对其生物活性进行了大量研究，发现柠檬苦素类物质具有抗癌活性、昆虫拒食作用以及镇痛、抗炎、抗焦虑、镇静等作用。

目前，文献报道分离纯化柠檬苦素类物质的方法主要有有机溶剂提取法、重结晶和分布结晶法、硅胶柱层色谱、薄层色谱、大孔吸附树脂法及制备型高效液相色谱法等。有机溶剂提取法是目前国内外制备柠檬苦素类物质使用最广泛的方法，比较容易实现工业化生产。刘君用不同的有机溶剂提取柠檬苦素类物质，发现氯仿的效果最好，其次为丙酮和乙腈。王青山采用浸提脱脂，确定石油醚（60-90℃）为脱脂溶剂，利用丙酮为抽提溶剂进行索氏提取。王青山对香柚种子的丙酮提取物进行结晶法分离，选用二氯甲烷/异丙醇混合体系分离出柠檬苦素晶体。谈宗华利用酶解法提取柠檬籽中柠檬苦素类物质，并将提取液用AB-8树脂柱层析，洗脱液进行硅胶色谱柱层析，可得到含量90%以上的柠檬苦素类物质。何中燕从16种大孔吸附树脂中筛选出了最适合柠檬苦素类物质分离纯化的HPD-722大孔吸附树脂，得到的固形物中柠檬苦素类物质含量>30%，并申请了专利。

虽然，上述方法能够制备得到具有一定纯度和得率的柠檬苦素类提取物，但是由于受到技术手段的限制以及加工过程中使用了大量的有毒有机溶剂或化学制剂，使得产品明显存在安全性欠佳、产品的品质和市场竞争力不足等缺陷。

而大孔吸附树脂分离纯化方法具有工艺简单、再生方便、经济环保、安全绿色等优点，近年来，已经成为众多天然产物分离纯化常用的手段。但是，树脂类型的不同，会对柠檬苦素类物质的吸附与解析效果产生很大的差距，因此筛选出一种对柠檬苦素类物质具有良好吸附与解析效果的树脂具有重大意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种高效、绿色安全、低成本、高得率、高纯度、适用于工业生产的以柑橘幼子的落果为原料生产柠檬苦素类提取物的方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种以柑橘幼子的落果为原料生产柠檬苦素类提取物的方法，包括以60%-80%体积浓度的食用乙醇于60-70℃从柑橘幼子的落果中回流提取柠檬苦素类粗提物；其特点是：还包括将上述柠檬苦素类粗提物以HP-20大孔吸附树脂分离纯化：将所述粗提物配制成柠檬苦素类物质浓度为4.0-5.0mg/mL的溶液，将此溶液以2-3.5BV/h的流速通过装有HP-20大孔吸附树脂的层析柱进行吸附及解析分离，待吸附饱和后，先用蒸馏水以3.0-5.0BV/h的流速冲洗树脂至无色，再用70%-80%体积浓度的食用乙醇以2-3BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在-0.07～-0.09MPa、45-55℃条件下浓缩，回收食用乙醇，真空冷冻干燥，即可。

上述以60%-80%体积浓度的食用乙醇于60-70℃从柑橘幼子的落果中回流提取柠檬苦素类粗提物是指：取柑橘幼子的落果于50-60℃烘干后粉碎，用60%-80%体积浓度的食用乙醇，按1g落果粉加8-15ml食用乙醇的比例，在60-70℃下回流提取2.0-3.0h，提取次数为1-2次，过滤，所得粗滤液离心（转速为3000-4000r/min、时间为5-15min），取上清液；将上清液在-0.07～-0.09MPa、45-55℃条件下浓缩，回收食用乙醇溶剂，即得粗提物。