[发明专利]制备流感病毒的多质粒系统

权利要求书

1.一种双向表达载体，该载体含有:

携带第一启动子的质粒，其中第一启动子位于第二启动子和双向多聚腺苷酸位点之间。

2.如权利要求1所述的载体，其中，所述第一和第二启动子方向相反，位于至少一个克隆位点两侧。

3.如权利要求1所述的载体，其中，所述双向多聚腺苷酸位点包括SV40多聚腺苷酸位点。

4.如权利要求1所述的载体，包括pAD3000。

5.如权利要求1所述的载体，该载体还含有一个双链核酸，该核酸包含至少一个插入到克隆位点内的流感病毒基因组节段。

6.如权利要求1所述的载体，其中，所述第一启动子和第二启动子可操作连接到同一双链病毒核酸的两条链上，该病毒核酸含有流感病毒基因组节段。

7.如权利要求1所述的双向表达载体，该载体包含:

携带位于第二启动子和SV40多聚腺苷酸位点之间的第一启动子的质粒，

其中，所述第一和第二启动子方向相反，位于至少一个流感病毒基因组节段两侧。

8.一种试剂盒，所述试剂盒含有权利要求1所述的一种或多种表达载体，以及一种或多种下列组分:细胞、缓冲液、细胞培养基、说明书、包装材料和容器。

9.如权利要求8所述的试剂盒，所述试剂盒包含一组表达载体，其中每个表达载体含有至少一个流感病毒基因组节段。

10.如权利要求9所述的试剂盒，所述试剂盒包含携带第一流感病毒株至少6个内部基因组节段的一组表达载体，所述流感病毒株至少具有下列一种表型特征:温度敏感性、冷适应性及减毒特性。

11.如权利要求9所述的试剂盒，其中，所述表达载体含有编码突变的HA和/或NA抗原的核酸文库。

12.一种组合物，所述组合物包括:

含有至少一种细胞的能在低于或等于35℃的温度下增殖性生长的细胞培养物，其中至少有一种细胞含有一组载体，该组载体含有流感病毒基因组。

13.如权利要求12所述的组合物，该组合物还含有细胞培养基。

14.如权利要求12所述的组合物，其中，该组载体包括双向表达载体。

15.如权利要求14所述的组合物，所述双向表达载体携带位于第二启动子和SV40多聚腺苷酸位点之间的第一启动子的质粒；

其中，所述第一和第二启动子方向相反，位于至少一个流感病毒节段两侧。

16.一种细胞培养系统，该系统包括:

含有至少一种细胞的增殖性生长的细胞培养物，其中至少有一种细胞含有一组载体，该组载体含有流感病毒基因组；以及

能在低于或等于35℃的温度下培养细胞培养物的调节剂。

17.如权利要求16所述的细胞培养系统，该系统还包括细胞培养基。

18.如权利要求16所述的细胞培养系统，其中，这组载体包括双向表达载体。

19.如权利要求16所述的细胞培养系统，所述双向表达载体携带位于第二启动子和SV40多聚腺苷酸位点之间的第一启动子的质粒；

其中第一和第二启动子方向相反，位于至少一个流感病毒基因组节段两侧。

20.人工改造的重组或重排列流感病毒，该病毒包含在选自PB1³⁹¹、PB1⁵⁸¹、PB1⁶⁶¹、PB2²⁶⁵和NP³⁴的位置上有一个或多个氨基酸取代的A型流感病毒株；或在选自PB2⁶³⁰、PA⁴³¹、PA⁴⁹⁷、NP⁵⁵、NP¹¹⁴、NP⁴¹⁰、NP⁵⁰⁹、M1¹⁵⁹和M1¹⁸³的位置上有一个或多个氨基酸取代的B型流感病毒株。