[发明专利]制备流感病毒的多质粒系统

权利要求书

1.人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，该病毒包含：

使PB1多肽具有391位为谷氨酸和581位为甘氨酸的突变，其中所述PB1多肽在氨基酸残基457位包含谷氨酸；和所述流感病毒具有温度敏感表型。

2.如权利要求1所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于,其中所述PB1多肽具有661位为苏氨酸的氨基酸取代。

3.如权利要求2所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于,PB1多肽中的氨基酸取代由391位为谷氨酸、581位为甘氨酸，和661位为苏氨酸构成。

4.如权利要求1-3任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，还包含一个或多个突变，导致在PB2多肽中包含265位为丝氨酸的氨基酸取代。

5.如权利要求4所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，在PB2多肽中的氨基酸取代由265位为丝氨酸组成。

6.如权利要求1-5任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，还包含一个或多个突变，导致在NP多肽中包含34位为甘氨酸的氨基酸取代。

7.如权利要求6所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，在NP多肽中的氨基酸取代由34位为甘氨酸组成。

8.如权利要求7所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，

PB1多肽中的氨基酸取代由391位为谷氨酸、581位为甘氨酸，和661位为苏氨酸构成;

在PB2多肽中的氨基酸取代由265位为丝氨酸组成;

在NP多肽中的氨基酸取代由34位为甘氨酸组成。

9.如权利要求1-8任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，其为6:2重排列A型流感病毒。

10.如权利要求1-9任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，在33℃的细胞培养物中的生长的病毒滴度比在39℃生长的同一细菌至少高4log₁₀。

11.如权利要求1-10任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，所述病毒包含PR8多核苷酸。

12.如权利要求1-11任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，所述病毒具有减毒表型。

13.如权利要求12所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于,所述A型流感病毒在雪貂减毒试验中比不包含所述氨基酸取代的病毒复制至少下降3.0个log₁₀。

14.如权利要求13所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，其特征在于，所述流感病毒在雪貂减毒试验中无法检测到其复制。

15.一种包含权利要求1-14任一所述的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒和运载体或赋形剂的组合物。

16.权利要求15所述的组合物的用途，其特征在于，用于制备激发免疫反应的药物。

17.一种制备人工改造的重组或重排列的A型流感病毒的方法，所述方法包括:

a)在A型流感病毒基因组中引入突变，所述突变得到包含391位为谷氨酸和581位为甘氨酸的氨基酸取代的PB1多肽，所述PB1多肽在457位包含谷氨酸;

b)将一组载体导入到一群培养的宿主细胞内，所述载体对应于A型流感病毒基因组，多个载体包含a)中所述的突变；

c)培养该群宿主细胞；以及

d)回收c)中的宿主细胞产生的人工改造的重组或重排列的A型流感病毒，所述A型流感病毒具有温度敏感表型。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于,其中所述PB1多肽具有661位为苏氨酸的氨基酸取代。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于,包括在A型流感病毒基因组中引入突变，所述突变导致PB1多肽中的氨基酸取代由391位为谷氨酸、581位为甘氨酸，和661位为苏氨酸构成。