[发明专利]L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性的检测板及其制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是涉及一种L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性的检测板及其制作方法。

背景技术

L-丙氨酸属于脂肪族的非极性氨基酸，其在医药和食品领域有广泛应用，在医药领域，L-丙氨酸可作为多种医药的合成中间体，如用于合成氨基酸输液，在食品领域，L-丙氨酸可用于清凉饮料、合成酒以及其他食品的调味品。目前，L-丙氨酸的工业生产以生物酶法为主，即利用工程菌株产生的L-天冬氨酸-β-脱羧酶催化L-天冬氨酸脱羧生成L-丙氨酸，在生产过程中工程菌株的产酶能力及酶的活性判断至关重要，采用快速、直观、灵敏的酶活测定方法一方面可以降低检测成本，另一方面可以帮助生产者在较短时间内判定酶活性，从而及时采取应对措施，以保证生产的质量及效率。目前，L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活的检测方法有检压法、酶法、高效液相法及茚三酮显色法等，上述检测方法均成本高，且需要较高的实验室条件与特定的专业技术人员，难以满足工业生产需求。

中国杂志《药物生物技术》1996年第3卷第2期第105-108页中公开了一种名称为“氧化显色法测定L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活力”的文献资料，其中介绍到储瑞蔼、吕炜峰等人采用氧化显色法测定L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活力，具体测定原理为：先将L-丙氨酸在酸性条件下被亚硝酸钠氧化成乳酸，再用浓硫酸将乳酸氧化成乙醛，乙醛能与对羟基联苯结合生成蓝紫色化合物，且在波长为576.8nm处有最大吸收，上述方法是通过检测L-丙氨酸的含量得到L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活，该方法使用的仪器设备比较简单，但是对操作人员要求较高，同时检测步骤繁琐，检测耗费时间长。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种可快速、直观、灵敏的检测L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性的检测板。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性的检测板，其特征在于：所述检测板为琼脂板，琼脂板上开设有盲孔，所述琼脂板的原料组分包括琼脂粉、L-天冬氨酸和酸碱指示剂。

本发明的另外一个目的是公开了一种L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性的检测板的制作方法，其包括以下步骤：

a）将琼脂粉、L-天冬氨酸、酸碱指示剂和水溶剂混合后用氢氧化钠溶液调节pH至5.8～6.8；

b）将上述混合溶液加热至溶解，然后倒入模具中冷却凝固，所述模具的腔体底面和/或模具的盖体的内侧板面设置有凸块；

c）脱模，即得琼脂板。

本发明的再一个目的是公开了一种L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性的检测板的制作方法，其包括以下步骤：

a）将琼脂粉、L-天冬氨酸、酸碱指示剂和水溶剂混合后用氢氧化钠溶液调节pH至5.8～6.8；

b）将上述混合溶液加热至溶解，然后倒入模具中冷却凝固；

c）脱模，即得琼脂板；

d）在琼脂板的至少一个板面上开设盲孔。

由于采用上述技术方案，利用L-天冬氨酸-β-脱羧酶使L-天冬氨酸脱羧生成丙氨酸过程中的pH变化使酸碱指示剂变色的原理，向琼脂板的盲孔中注入L-天冬氨酸-β-脱羧酶液，然后将琼脂板放入30～35℃的恒温培养箱中，定时观察盲孔周围的颜色，根据变色区域的颜色深度、面积大小以及变色时间即可直观判断酶的活性，采用本发明所述的琼脂板检测L-天冬氨酸-β-脱羧酶活性具有方便快捷、灵敏度高的特性，且检测过程无需借助任何试剂、仪器，适合在工业生产中特别是在生产现场快速估测L-天冬氨酸-β-脱羧酶的活性。

附图说明

图1是琼脂板的立体示意图；

图2是琼脂板的结构示意图；

图3是琼脂板的使用状态图。

具体实施方式

以下通过实施例1～3对本发明加以说明。

实施例1