[发明专利]热休克蛋白47胶质瘤相关肿瘤抗原及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及热休克蛋白47胶质瘤相关肿瘤抗原，更具体地，涉及热休克蛋白47作为与预后相关的恶性胶质瘤特异性肿瘤抗原以及所述抗原的两个CTL表位及其九肽氨基酸序列，及其所述CTL表位诱导T细胞反应用以临床预后判定，及其在制备恶性胶质瘤免疫治疗疫苗中的用途。 

背景技术

现有技术公开了胶质瘤（glioma）是中枢神经系统最常见的肿瘤，其中恶性胶质瘤(WHO III、IV级)治愈率低，复发率高，预后极差，尤其是对于IV级的胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）患者。临床实践显示，由于大多数胶质瘤呈浸润性生长，与正常组织无明显分界，所以单靠手术无法根治。目前，对于GBM推荐标准治疗方案，即手术后同步放化疗加6个疗程的替莫唑胺(TMZ)化疗，其平均生存期仅为12-15个月。因此，对于恶性胶质瘤，寻找更有效的治疗方法是目前临床急需解决的难题。目前免疫治疗，尤其是利用自身T细胞杀伤显微手术后残留的肿瘤细胞，得到了业内极大的关注。 

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是进化上高度保守的蛋白，其功能涉及细胞生物学的各个方面。HSP目前分成如下六类：Hsp100,Hsp90,Hsp70,Hsp60,Hsp40和小分子HSP。就免疫的角度而言，HSP本身可以作为抗原，或者作为抗原呈递的辅佐分子。研究显示，HSP可以绑定抗原肽从而呈递给抗原呈递细胞（antigen presentation cell，APC）。癌症细胞上的HSP肽复合物能够激发自身的适应性和固有免疫系统。国际专利公布号WO2009/117116EN---热休克蛋白GP96的疫苗接种及其使用方法中，公开了被基因修饰以表达编码分泌形式的热休克蛋白(hsp)gp96多肽的核酸的肿瘤细胞。该HSP-96肽疫苗已经安全地用于GBM患者的临床治疗（Crane CA,etal.Clin Cancer Res,2013;19:205-214.）。 

HSP47，亦称SERPINH1或者colligin2，作为胶原特定的分子伴侣，其参与各种胶原前蛋白成熟的各个过程。对于胶质瘤而言，目前有关HSP47的文献报道中，涉及HSP47在胶质瘤血管上的表达（Mustafa D,et al.Brain Pathol,2010;20:50-65.）；HSP47参与了胶质瘤新生血管的发生发展（Mustafa DA,et al.Molecular&cellular proteomics:MCP,2007;6:1147-1157.）。迄今，尚未见HSP47作为恶性胶质瘤相关抗原或者其他肿瘤的相关抗 原的报道。 

表位是抗原分子中可与CTL、Th和B细胞表面受体结合，诱导特异性细胞免疫和体液免疫，进而产生免疫保护作用的一段氨基酸序列。有研究提出，通过筛选富含多个CTL、Th和B细胞优势表位的氨基酸序列为抗原，可达到既能诱导免疫应答又可减少免疫病理反应的目的；能够有效增强表位提呈的效率，解决表位疫苗的免疫原性弱目的。胶质瘤相关抗原的T细胞表位能诱导T细胞反应从而杀伤肿瘤细胞，在已报道的胶质瘤相关抗原中，涉及T细胞表位的有下列基因：SART-1，SART-3,IL-13receptora2chain,ARF4L,GALT3,AIM-2,EphA2,EGFRvIII,HER-2,gp100,MAGE-1,gBK,TRP-2,Sox2,Sox11,Sox6,HSD3B7等。其相应的T细胞表位如表1所示。 

表1胶质瘤相关抗原的表位肽 

Author   Year Gene name      HLA classification Amino Acid position Sequence 

研究显示，上述胶质瘤相关抗原的表位肽尚存在如下几个问题：①部分抗原在正常脑组织 存在高表达，如ARF4L、GALT3等；②上述抗原肽诱导的CTL反应是否与预后有关尚不清楚。 

针对现有技术中存在的不足，本申请的发明人拟提供一种全新的与预后相关的恶性胶质瘤特异性肿瘤抗原及其两条保护性的9肽CTL表位，及其诱导的T细胞免疫应答用以临床预后判定。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种全新的热休克蛋白47胶质瘤相关肿瘤抗原，具体涉及热休克蛋白47作为与预后相关的恶性胶质瘤特异性肿瘤抗原以及所述抗原的两个保护性CTL表位及其九肽氨基酸序列，及其所述CTL表位诱导T细胞免疫应答用以临床预后判定，及其在制备恶性胶质瘤免疫治疗疫苗中的用途。