[发明专利]一种快速检测盐酸克伦特罗试剂盒的研发与应用

说明书

技术领域：

本发明属于食品质量安全检测领域，特别涉及一种对盐酸克伦特罗特异性快速检测试剂盒的研发与应用。主要应用于饲料、尿液、畜产品等样本中残留盐酸克伦特罗的快速检测。

背景技术：

盐酸克伦特罗(Clenbuterol)又名双氯醇胺，氨哮素，克喘素，是一种人工合成的B2-肾上腺素受体激动剂，用于防治支气管哮喘、哮喘性慢性支气管炎及肺气肿等呼吸系统疾病。在兽医临床上，当其应用剂量达到治疗量的5～10倍、且应用时间较长时，能降低动物胴体脂肪沉积、增加肌肉的合成。因此又有“瘦肉精”之称。盐酸克伦特罗在动物体内吸收快、分布广、半衰期长、易积累，人在食用了残留有盐酸克伦特罗的肉品后可能引起心悸、震颤、头晕、头痛等症状甚至导致死亡。因此，必须加强饲料、尿液、畜产品等样本中残留盐酸克伦特罗有效的监测和快速的检测。

目前，检测盐酸克伦特罗残留的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱一质谱联用法、毛细管电泳法和酶联免疫吸附分析法。采用仪器分析法需要昂贵的仪器设备、专业化的实验室和训练有素的专门人才，对样品前处理的要求高、过程复杂、速度慢、选择性差，难以适应大量样本和现场快速检测的要求。本发明的快速检测盐酸克伦特罗试剂盒具有灵敏度高、分析成本低、简便快捷、仪器设备简单等优点，适合于大批量样品的快速检测。但现有的盐酸克伦特罗免疫吸附检测试剂盒的研制，由于人工抗原的合成是先将盐酸克伦特罗苯环上的氨基重氮化，然后在弱碱性条件下与蛋白质上的酪氨酸共价偶联，这样就造成了盐酸克伦特罗的特异性部分被蛋白质大分子掩盖，所获抗体与盐酸克伦特罗结构类似物有比较严重的交叉反应，在实际检测过程中经常出现假阳性，同时有一些阳性样品不能被确认。

发明内容：

本发明的目的是提供一种对盐酸克伦特罗具有高选择性、高灵敏度，适合饲料、尿液、畜产品等样本中残留盐酸克伦特罗快速检测的竞争性胶体金免疫吸附分析技术。

本发明的又一个目的是提供一种特异性强、灵敏度高、方便快捷、廉价高效，适合饲料、尿液、畜产品等样本中残留盐酸克伦特罗现场快速检测的竞争性胶体金免疫吸附检测试剂盒。

本发明的技术方案一：对盐酸克伦特罗具有特异性的胶体金免疫吸附分析技术及其检测试剂盒，其特征是以盐酸克伦特罗与卤代羧酸酯为起始原料。

所述半抗原是以盐酸克伦特罗与卤代羧酸酯为起始原料反应生成的衍生物。

所述人工抗原是采用活性酯法或混合酸酐法将所述半抗原与蛋白质共价偶联而成。

以所述抗体或包被原包被聚苯乙烯微孔板，以0.5％明胶封闭微孔表面未被吸附的位点。

本发明的技术方案二：对盐酸克伦特罗具特异性的胶体金免疫吸附分析检测试剂盒，其特征是由盒体及置于盒体内的可拆卸式聚苯乙烯微孔板、对盐酸克伦特罗具特异性亲合力的抗体或包被原、缓冲液、封闭液(也可事先将所述抗体或包被原包被在微孔板上并封闭后置盒体内)、盐酸克伦特罗标样、标记物、底物液、显色剂、终止液和使用说明书组成。

运用上述对盐酸克伦特罗其特异性的竞争性胶体金免疫吸附分析技术，在盒内设置相关试剂与材料，制备免疫检测试剂盒，用于饲料、尿液、畜产品样本中残留盐酸克伦特罗的快速检测。试剂盒检测盐酸克伦特罗的线性浓度范围是10≈’1Oo Vg/mL，检钡4限＜0.Ing/mL。

本发明的科学性强、技术先进，成本低，应用方法简便。基本依据是小分子化合物免疫分析化学原理和技术。分子量小于5000道尔顿的化合物一般不具备免疫原性，将突出盐酸克伦特罗分子结构特征的半抗原与蛋白质共价偶联制备人工抗原和包被原，以人工抗原免疫动物产生对盐酸克伦特罗具特异性亲合力的抗体。小分子化合物虽然不具备免疫原性但具有反应原性，能与相应抗体在离体条件下发生免疫结合并符合质量作用定律。运用该技术，在盒体内设置相关试剂与材料，制备免疫检测试剂盒，用于饲料、尿液、畜产品等样本中残留盐酸克伦特罗的现场快速检测。通过参看说明书，一般工作人员也可以进行现场检测分析，便于推广使用和运用。

具体实施方式：

一、对克伦特罗具特异性的竞争性胶体金免疫吸附分析技术实施例

1、将盐酸克伦特罗与Y一溴代丁酸酯反应生成衍生物共价偶联合成人工抗原和包被原。

2、用所述抗体包被聚苯乙烯微孔板，以0.59′o明胶封闭微孔表面未吸附抗体的位点。