[发明专利]一种山栀子酮苷的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种栀子酮苷的制备方法。

背景技术

栀子酮苷属于环烯醚萜糖苷类物质，CAS号54835-76-6，分子式C16H22O10，分子量374.35，分子结构式：

 山栀子又叫黄栀子、山栀、白蟾，是茜草科植物栀子的果实，含黄酮类栀子素、果胶、鞣质、藏红花素、藏红花酸、D-甘露醇、廿九烷、β-谷甾醇，栀子苷、栀子酮苷及山栀苷B等成分，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒的功效，用于治疗心脑血管、肝胆等疾病。

通过文献检索，现有栀子酮苷的制备方法，多采用硅胶柱分离。此类方法存在操作复杂，收率低的技术缺陷。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术不足和缺陷，提供一种操作简便的山栀子苷B的制备方法。

本发明的目的是这样来实现的：一种栀子酮苷的制备方法，其特征在于在于以下步骤：

1）将鲜山栀子原料打浆，加入3-10倍量95%乙醇充分搅拌，沉淀，抽滤上清液，滤渣再加入95%乙醇溶液充分搅拌，合并两次提取液回收乙醇，浓缩液加入适量水稀释后加入超滤膜超滤，透过液再加入大孔树脂柱吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液用纳滤膜纳滤，收集浓缩液；

   2）上述浓缩液加入水饱和正丁醇萃取，收集萃取液减压浓缩，浓缩液采用高速逆流色谱分离，根据图谱收集流分，流分减压干燥即得。

    所述步骤1）中的超滤膜可选截留分子量3000-6000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量为300的中空纤维素膜。

     所述步骤1）中的大孔树脂型号可选HZ816、ADS-21、NK-9和NK-II中一种。

     所述步骤1）中的乙醇溶液梯度洗脱为：先用3-5倍柱体积20-40%乙醇溶液洗脱，再用5-10倍量60-80%乙醇溶液洗脱。

 所述步骤2）高速逆流色谱分离条件为：溶剂系统选乙酸乙酯、正丁醇、水，混合比例1-7:2-5:4-9，取上相做固定相，下相做流动相，主机转速700-1000rpm，流速1-3ml/min。

采用本发明制备栀子酮苷，方法操作简单，污染小，能耗低，易于工业化生产。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

取20kg鲜山栀子原料打浆，加入10倍量95%乙醇充分搅拌，沉淀，抽滤上清液，滤渣再加入5倍量95%乙醇溶液充分搅拌，合并两次提取液回收乙醇，浓缩液加入水稀释后加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液加HZ816大孔树脂吸附，先用5倍柱体积20%乙醇溶液洗脱，再10倍量60%乙醇溶液洗脱，洗脱液再加入截留分子量为300的中空纤维素膜纳滤，收集浓缩液加入等体积水饱和正丁醇溶液萃取2次，萃取液浓缩成浸膏。取乙酸乙酯、正丁醇、水，按比例1:2:4混合，取上相注入色谱管做固定相，主机转速800rpm，取下相做流动相，流速3ml/min，根据图谱收集流分，流分减压干燥得白色栀子酮苷B3.2g，经HPLC检测，含量98.4%。

实施例2：

取20kg鲜山栀子原料打浆，加入8倍量95%乙醇充分搅拌，沉淀，抽滤上清液，滤渣再加入7倍量95%乙醇溶液充分搅拌，合并两次提取液回收乙醇，浓缩液加入水稀释后加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液加ADS-21大孔树脂吸附，先用5倍柱体积30%乙醇溶液洗脱，再8倍量70%乙醇溶液洗脱，洗脱液再加入截留分子量为300的中空纤维素膜纳滤，收集浓缩液加入等体积水饱和正丁醇溶液萃取3次，萃取液浓缩成浸膏。取乙酸乙酯、正丁醇、水，按比例2:3:6混合，取上相注入色谱管做固定相，主机转速900rpm，取下相做流动相，流速2ml/min，根据图谱收集流分，流分减压干燥得白色栀子酮苷B4.1g，经HPLC检测，含量96.5%。

实施例3：