[发明专利]水稻Os74蛋白及其应用

权利要求书

1.如下任一物质在提高粳稻的抗病性中的应用： 

（1）SEQ ID No.2所示Os74蛋白； 

（2）SEQ ID No.2所示Os74蛋白的编码基因； 

（3）含有（2）所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌； 

所述抗病性为抗水稻白叶枯病； 

所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1中自5’末端起第809-3190位核苷酸所示。 

2.干扰载体在降低粳稻的抗病性中的应用； 

所述干扰载体按照如下方法制备：将SEQ ID No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段插入出发载体pCDU-d40-IN的Kpn Ⅰ和PmaC Ⅰ位点间，得到中间载体；将SEQ ID No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段的反向互补片段插入中间载体的Hind Ⅲ和Sma Ⅰ位点间，最终得到干扰载体； 

所述pCDU-d40-IN载体按照如下方法制备： 

（1）以中花17的基因组为模板，以OW40BKF和OW40SPmR为引物扩增OsWRKY40基因的干涉片段； 

（2）将扩增得到的OsWRKY40基因的干涉片段连接pMD-18T，得到pMD18-T-W40-B； 

（3）BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切pMD18-T-W40-B，得到基因片段；BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pUC-Catin，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接得到重组质粒pUC-40-IN； 

（4）BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pUC-40-IN，得到基因片段；BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pBS-sk-Ubi载体，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接得到重组质粒pBS-W40-IN； 

（5）以中花17的基因组为模板，以OW40SmF和OW40H3R为引物扩增OsWRKY40基因的干涉片段； 

（6）将扩增得到的OsWRKY40基因的干涉片段连接pMD-18T，得到pMD18T-W40-H； 

（7）Sma Ⅰ和HindⅢ双酶切pMD18T-W40-H，得到基因片段；Sma Ⅰ和HindⅢ双酶切pCoUbi:Flag-OsERF922载体，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接，得到重组质粒pCDU-W40； 

（8）用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切pBS-W40-IN，得到基因片段；EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切pCDU-W40，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接得到重组质粒pCDU-d40-IN； 

所述OW40BKF的序列为5’-ATGGATCCGGTACCATGGATCTGATGGGTGG-3’； 

所述OW40SPmR的序列为5’-TTGTCGACACGTGGCCGGTGCGGTTCAG-3’； 

所述OW40SmF的序列为5’-TACCCGGGATCTGATGGGTGGGTACG-3’； 

所述和OW40H3R的序列为5’-GTAAGCTTCAGCATGGAGATCACCTTCTTG-3’； 

所述pBS-sk-Ubi载体按照如下方法制备： 

用Pvu Ⅱ和Sac Ⅰ双酶切pCoU载体，得到基因片段；用Pvu Ⅱ和Sac Ⅰ双酶切pBluescript SK，得到载体大片段；将基因片段与载体大片段连接，得到重组载体，将其命名为pBS-sk-Ubi； 

所述抗病性为抗水稻稻瘟病或水稻白叶枯病。 

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述水稻稻瘟病是由水稻稻瘟病菌引起的；所述水稻白叶枯病是由水稻白叶枯病菌引起的。 

4.一种制备水稻白叶枯病的抗病性增强的转基因水稻的方法，包括如下步骤：将SEQ ID No.2所示Os74蛋白的编码基因导入出发粳稻中，得到转基因粳稻；与出发粳稻相比，转基因粳稻的水稻白叶枯病的抗病性增强； 

所述编码基因是通过重组表达载体导入所述植物中的，所述重组表达载体是将所述编码基因插入出发载体pCoUbi:Flag-OsERF922的多克隆位点得到的； 

所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1中自5’末端起第809-3190位核苷酸所示。