[发明专利]鸭病毒性肝炎病毒、鸭病毒性肝炎灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及鸭病毒性肝炎病毒、鸭病毒性肝炎灭活疫苗及其制备方法。 

背景技术

鸭病毒性肝炎病是一种主要侵害雏鸭的急性、败血性、接触性传染病。该病主要感染7日龄内雏鸭，发病后为急性经过，发病率可达100%，死亡率可高达80～100%。10日龄以上的鸭为隐形感染经过，死亡率随着日龄的增大而降低。鸭病毒性肝炎病已经对养鸭业造成了巨大经济损失，成为了养鸭业危害最大的疫病。 

该病在世界各地均有爆发，且常造成大面积流行，主要是危害20日龄以内的雏鸭，并且造成7日龄以内鸭100%发病死亡。然而对于雏鸭，其免疫系统发育尚不完善，疫苗免疫在实践操作中存在诸多困难因素和免疫应答不理想的实际问题。因此，制备特异性高免蛋黄抗体预防和控制鸭病毒性肝炎疾病，成为控制本病暴发流行的最经济有效的方法。 

然而，目前国内已经上市的鸭病毒性肝炎高免抗体存在效价不稳定、鸭胚可以垂直传播某些同源疾病、鸭胚质量不合格、鸭胚蛋黄抗体生产工艺存在隐患等诸多问题。因此，有关鸭病毒性肝炎高免抗体的研究还有待进一步改进。 

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种鸭病毒性肝炎病毒、鸭病毒性肝炎灭活疫苗及其制备方法。 

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：发明人首先从山东某鸭厂，采集患病鸭肝脏组织，配以灭菌PBS进行研磨，过滤离心之后取上清液，经0.22um微孔滤膜过滤除菌后，接种11～13日龄SPF鸡胚尿囊腔，37摄氏度下孵育，弃去48小时之内的死亡鸡胚，收集48～144小时内死亡的鸡胚，采集尿囊液及羊水，分离得到一株鸭病毒性肝炎病毒，该病毒在经过灭活后可以用作制备鸭病毒性肝炎灭活疫苗，还可以进一步利用制备得到的鸭病毒性肝炎灭活疫苗制备与该疫苗特异性结合的抗体，该疫苗和抗体均可用于鸭病毒性肝炎的治疗和预防。 

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了鸭病毒性肝炎病毒，该病毒以保藏号CGMCC No.7804，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。根据本发明实施例，鸭病毒性肝炎病毒是从患有鸭病毒性肝炎疾病的鸭的肝脏中分离得到，其分离得到的鸭病毒性肝炎病毒株毒性好，具有良好的免疫原性，可作为灭活疫苗生产毒株及检验毒种，根据本发明一个实施例，利用该鸭病毒性肝炎病毒生产鸭病毒性肝炎灭活疫苗，有效提高鸭病毒性肝炎灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高鸭病毒性肝炎灭活疫苗安全性及免疫保护期。 

在本发明的另一方面，本发明提出了上述鸭病毒性肝炎病毒在制备鸭病毒性肝炎灭活疫苗中的用途，在本发明一个实施例中，根据鸭病毒性肝炎病毒交叉免疫保护试验证明，该鸭病毒性肝炎病毒具有很好的交叉免疫保护作用。因此利用该鸭病毒性肝炎病毒生产鸭病毒性肝炎灭活疫苗，可以有效提高鸭病毒性肝炎灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高鸭病毒性肝炎灭活疫苗免疫保护期和免疫效果。 

在本发明的再一方面，本发明提出了一种鸭病毒性肝炎灭活疫苗，根据本发明实施例，该鸭病毒性肝炎灭活疫苗包括灭活的鸭病毒性肝炎病毒。根据本发明实施例，该鸭病毒性肝炎灭活疫苗的免疫持续期至少可以维持4个月。根据本发明实施例，该鸭病毒性肝炎灭活疫苗可在2～8摄氏度下保存12个月，因此该疫苗具有良好的稳定性。 

根据本发明实施例，上述鸭病毒性肝炎灭活疫苗是被灭活的，可以采用的灭活剂种类并不受特别限制，只要可以有效破坏鸭病毒性肝炎病毒的核酸结构以及使蛋白质变性即可，但不破坏鸭病毒性肝炎病毒的抗原性及血凝性。根据本发明一个实施例，所采用的灭活剂为甲醛，甲醛可以有效破坏鸭病毒性肝炎病毒的DNA结构，进而达到灭活鸭病毒性肝炎病毒的目的。根据本发明实施例，所采用的灭活剂甲醛终浓度并不受特别限制，只要能够有效灭活鸭病毒性肝炎病毒即可。对所述鸭病毒性肝炎病毒进行灭活可以包括：在37摄氏度下，利用终浓度为0.1%～0.3%的甲醛对鸭病毒性肝炎病毒培养液进行灭活处理48小时。由此可以有效对鸭病毒性肝炎病毒进行灭活。 

在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备鸭病毒性肝炎灭活疫苗的方法，该方法可以包括：对上面所述的鸭病毒性肝炎病毒进行灭活，以便获得经过灭活的鸭病毒性肝炎病毒；利用经过灭活的鸭病毒性肝炎病毒制备水相；以及将水相和油相按照体积比为1：3进行混合乳化搅拌，以便获得该鸭病毒性肝炎病毒灭活疫苗。由此，有效提高鸭病毒性肝炎灭活疫苗的免疫原性，从而进一步提高鸭病毒性肝炎灭活疫苗免疫保护期和免疫效果。