[发明专利]一种表达CD133的重组腺病毒及其用途有效
| 申请号： | 201310353962.0 | 申请日： | 2013-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN103436556A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 沈政 | 申请（专利权）人： | 沈政 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 100083 北京市海淀区北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 cd133 重组 病毒 及其 用途 | ||
1.一种表达CD133的重组腺病毒，其特征在于，其携带人CD133基因，优选地，所述人CD133基因的序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，其表达人CD133蛋白，优选地，所述人CD133蛋白的序列如SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求1或2所述的重组腺病毒，其特征在于，构建所述重组腺病毒所用的穿梭质粒为pShuttle-CMV；
优选地，构建所述重组腺病毒所用的病毒骨架质粒为pAdeasy-1；
优选地，构建所述重组腺病毒所用的包装细胞为哺乳动物细胞，优选人胚肾293细胞。
4.一种重组腺病毒质粒，其特征在于，其通过携带人CD133基因的重组穿梭质粒与病毒骨架质粒同源重组得到；
优选地，所述重组穿梭质粒为pShuttle-CMV携带人CD133基因构成的；
优选地，所述病毒骨架质粒为pAdeasy-1；
优选地，所述同源重组发生在大肠杆菌内，优选大肠杆菌BJ5183。
5.如权利要求4所述的重组腺病毒质粒的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括将线性化的重组穿梭质粒pShuttle-CMV-CD133转化包含病毒骨架质粒pAdeasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183进行同源重组，筛选阳性克隆，并从所述阳性克隆中提取所述重组腺病毒质粒；
优选地，所述线性化为PmeI酶切线性化；
优选地，所述筛选阳性克隆为使用含卡那霉素的LB培养基平板筛选；
任选地，还包括将所述重组腺病毒质粒转化感受态大肠杆菌DH10B，并大量抽提质粒备用。
6.如权利要求1至3中任一项所述的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将如权利要求4所述的重组腺病毒质粒线性化后转染哺乳动物细胞、优选人胚肾293细胞，至出现明显细胞病变效应后，收集细胞，反复冻融，离心得到包含所述重组腺病毒的上清液；
优选地，所述线性化采用PacI酶切线性化；
优选地，-70℃和37℃交替条件下反复冻融2～4次，优选3次；
任选地，还包括将所述上清液感染哺乳动物细胞、优选人胚肾293细胞以扩增所述重组腺病毒。
7.一种表达CD133蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括用如权利要求1至3中任一项所述的重组腺病毒感染哺乳动物细胞、优选人胚肾293细胞，使CD133蛋白在所述细胞中表达。
8.一种表达CD133蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括用如权利要求4所述的重组腺病毒质粒线性化后转染哺乳动物细胞、优选人胚肾293细胞，使CD133蛋白在所述细胞中表达。
9.如权利要求1至3中任一项所述的重组腺病毒在CD133蛋白表达中的用途。
10.如权利要求4所述的重组腺病毒质粒在CD133蛋白表达中的用途。
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