[发明专利]一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业技术和生物技术。具体是一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法。

背景技术

稻纹枯病是我国水稻生产的首要病害，每年可造成68亿多公斤稻粮损失。该病害的科学有效防治有赖于该病害的基础研究，而许多基础研究又离不开人工接种发病这基本手段。至今，有关该病害的人工发病技术，已有不少成熟的方法，归结起来，主要有成株期接种和苗期接种方法两大类，并派生出撒施接种、嵌入接种等方法。一般地，成株期接种能获得更切合生产实际的结果，因而在品种抗病性评比和某些生产试验中应用较多，但在成株期接种方法体系中，存在费力耗时；占用空间场地较大；试验结果易受环境条件影响等突出弊病，因而阻碍了其在许多试验工作中的应用；苗期接方法，所用的稻苗相对地比成株期的小，试验占用时间和空间方面，与成株期接种方法相比，已大有改观，不过，当前国内外广为应用的苗期接种方法均是在稻苗的3～5叶期后进行接种，这种方法体系中，育苗耗时2周以上，接种观察耗时1周以上，试验工作一般要跨越3周多的时长，这对某些要求短期内获得结果的试验工作，如分子植病研究的致病突变体鉴定，抗病基因表达，以及侵染过程的病菌-寄主互作信息传递等，仍有时间过长之嫌；为获得健壮的稻苗，需要提供充分的阳光和补充肥料，实施全套工作仍需使用温室等较大的空间场地；而且在试验期间的局部条件，如湿度、温度、肥水等控制方面，仍存在一定的难度，或者受到装备条件的限制等。

发明内容

本发明的目的是利用病菌能侵染微小稻苗而正常致病的特性，提供一种利用无土培育微稻苗接种稻纹枯病的配套器具与实施方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

1.一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法的配套器具，其特征在于：该配套器具的构件由培养皿、玻璃罩、平底盘组成。

所述的玻璃罩将培养皿全部罩住；玻璃罩和培养皿全部置在平底盘内。

2.一种无土培育微稻苗接种稻纹枯病的人工发病方法，其特征在于，实施操作步骤如下：

1)配套器具准备：使用前用洁净剂洗涤干净配套器具培养皿、玻璃罩、平底盘。

2)育苗用水琼脂基质平板的制备：用水琼脂作无土培育微稻苗的基质，水琼脂基质平板的制备方法是：按比例：琼脂/水=3g/1000ml，称取琼脂放入干净水中，加热至全部琼脂熔化后，倒入培养皿中，形成约5mm厚的水琼脂基质平板。琼脂的用量比例，以熔化冷却后，能凝固但不过硬为宜，不同供货商的琼脂性能可能有异，因而用量有别。

3)微稻苗培育：取水稻种子按常规方法浸种催芽。选取催芽萌动一致的种子点播到制备好的水琼脂基质平板面上，将种子留在面上或按压入琼脂平板内；将播种后的培养皿转入平底盘内，取玻璃罩将培养皿罩在平底盘内，取清水注入平底盘，形成和保持薄层浅水，使玻璃罩内部封闭并形成罩内稳定的高湿状态。

将全套育苗装置放在室内能采光的地方。一般明亮的室内散射光即能满足微稻苗生长的要求，应避免直射阳光的照晒，这容易引起玻璃罩内增温。在温度为30℃条件下培育。

培育的微稻苗的苗高小于8cm，以4～5cm最合适。

4)接种体准备：将待接种菌株移植到PSA平板培养基上，PSA培养基为：马铃薯200g；蔗糖20g；琼脂20g；水1000ml；在温度30℃下培养至菌落刚长满平板，取直径为6mm打孔器在平板菌落外周打取大小一致的菌丝琼脂圆块，以此菌丝块作为定量接种的接种体。

5)接种操作：取步骤3）培育获得的微稻苗，打开微稻苗上方的玻璃罩，挑取步骤4）的菌丝块定量接种放置在微稻苗基部琼脂平板面上，菌丝块边缘触及微稻苗基部。

6)接种后管理：接种完成后，补充平底盘的薄层浅水，重新罩上玻璃罩，回到原来育苗的条件下继续培育，将温度条件改变为28℃。接种30小时后可见发病坏死斑，随时间推移到接种3天后，微稻苗上呈现清晰的较大病斑。

本发明的优点是：

1）无土法育苗，容易实现全过程的无菌化。

2）整套方法全程时间短；一般不超过一周。

3）占用空间小；且配套器具装置可以叠放，空间利用率高。

4）温度、湿度和水肥等重要发病条件容易控制，一致性好。

5）病害反应清晰稳定，结果重现性好。

6）实施操作简易，过程管理简单。

7）总体技术简单，容易实现技术方法的标准化。

附图说明

图1是本发明用的配套器具示意图。

图中：培养皿1，玻璃罩2，平底盘3。

图2是本发明配套器具的配套工作示意图。