[发明专利]一种低酰基结冷胶的提取方法

权利要求书

1.一种低酰基结冷胶的提取方法，包括以下制备步骤：

第一步，将混合菌液按照10％的接种量接入种子罐中进行培养，在温度为30℃，PH值7.2的条件下，培养24小时得到液体A，然后按液体A：发酵罐培养基为1∶10的体积比例转入发酵罐中培养，温度30℃，PH值7.2，培养时间72小时，得到发酵液；其中，种子罐培养基的组分为：蔗糖25g，蛋白胨5g，硫酸铵4.0g，酵母膏3.0g，柠檬酸3.5g，碳酸钙2.0g，蒸馏水1000ml；发酵罐培养基的组分为：蔗糖40g，蛋白胨8g，磷酸二氢钾3g，柠檬酸2.5g，碳酸钙2.0g，硫酸镁1g，蒸馏水1000ml；所述混合菌液由少动鞘脂单胞菌液和短小芽孢杆菌液按照重量比为10∶1混合而成，所述少动鞘脂单胞菌液或所述短小芽孢杆菌液菌液中菌体的浓度均约为1×10⁸个/mL；

第二步，往第一步获得的发酵液加入硅藻土和气相二氧化硅的混合物，边添加边搅拌，搅拌10min，搅拌速度为100r/min，然后用板框过滤，分别收集过滤后的滤液和菌体；其中所述混合物的添加量为发酵液重量的0.5％，所述硅藻土和气相二氧化硅的质量比为3∶1；

第三步，向第二步得到的滤液中加入液碱调节pH为10，升温至90℃～95℃，维持30～40分钟，进行脱酰基处理，降至室温；然后加入2～3倍体积的70％～90％乙醇，混合均匀，絮凝结冷胶；然后经膜过滤除去废液，得到絮凝结冷胶；并且低温旋转蒸发回收废液中的乙醇后，得到液体B；将上述絮凝结冷胶重新分散和溶解于水，得到结冷胶液体，然后加入占结冷胶液体体积6％～7％的饱和氯化钠溶液，沉淀析出结冷胶；

第四步，将第三步析出的结冷胶经螺杆式压榨机，去除多余的水分，得湿品结冷胶；然后将湿品结冷胶干燥、粉碎即得低酰基结冷胶；

第五步，将第二步获得的菌体以及第三步获得的液体B混合得到混合溶液，然后往混合溶液中添加玉米粉、高梁粉、豆渣以及麦麸，边添加边搅拌至糊状；最后通入蒸汽升温至110℃，蒸馏15分钟；然后将蒸馏物烘干、粉碎后，添加硫酸锌、维生素E以及绿原酸，混合均匀，获得猪饲料；其中，玉米粉、高粱粉、豆渣以及麦麸分别占混合溶液质量的6％，5％，2％和1％，硫酸锌、维生素E以及绿原酸分别占混合溶液质量的万分之一。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述少动鞘脂单胞菌优选为少动鞘脂单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)ATCC31461，所述短小芽孢杆菌优选为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)ATCC27142。

3.一种用于发酵生产低酰基结冷胶的混合菌液，其特征在于，所述混合菌液由少动鞘脂单胞菌液和短小芽孢杆菌液按照重量比为10∶1混合而成，所述少动鞘脂单胞菌液或所述短小芽孢杆菌液菌液中菌体的浓度均为1×10⁸个/mL；所述少动鞘脂单胞菌优选为少动鞘脂单胞菌(Sphingomonas paucimobi1is)ATCC31461，所述短小芽孢杆菌优选为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)ATCC27142。