[发明专利]利用克雷伯氏肺炎杆菌生产R-乙偶姻的方法

权利要求书

1.一种利用克雷伯氏肺炎杆菌生产R-乙偶姻的方法，其特征在于：所述方法是在好氧条件下，通过乙偶姻还原酶基因budC失活的克雷伯氏肺炎杆菌发酵生产R-乙偶姻。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤包括：

（1）构建乙偶姻还原酶基因budC失活的克雷伯氏肺炎杆菌突变株；

（2）将碳源、氮源、磷源和水，配制成培养基，并控制培养基中的金属离子和微量元素含量；

（3）在步骤（2）配制的培养基中，接入乙偶姻还原酶基因budC失活的克雷伯氏肺炎杆菌突变株进行好氧发酵培养，乙偶姻还原酶基因budC失活的克雷伯氏肺炎杆菌突变株将碳源转化成R-乙偶姻，并积累于发酵液中。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，构建的方法包括：通过乙偶姻还原酶基因的同源重组、转座子插入或诱变方法进行构建。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，碳源包括：葡萄糖、甘露糖、半乳糖、山梨糖、山梨醇、果糖、木糖、阿拉伯糖、核糖及它们所形成的寡糖、多糖和它们的混合物、衍生物，以及能在细胞内代谢生成丙酮酸的非糖类化合物；其中，衍生物包括：葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、2-酮基-D-葡萄糖酸和2,5-二酮基-D-葡萄糖酸；能在细胞内代谢生成丙酮酸的非糖类化合物包括：甘油、乳酸和二羟基丙酮；

碳源的浓度为5～300g/L。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，氮源包括：有机氮源和无机氮源；

其中，有机氮源包括：玉米浆、酵母粉、蛋白胨和豆饼粉；无机氮源包括：铵盐、硝酸及其盐类、亚硝酸及其盐类和尿素；

氮源的浓度为0.1～100g/L。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，磷源包括：磷酸和磷酸盐；

磷源的浓度为0.1～100g/L。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，金属离子包括：钾、镁、铁和锰；金属离子的浓度为0.1mg/L～10g/L；

微量元素包括：锌、钙、钼、钴、铜、镍和硼；微量元素的浓度为10ng/L～1mg/L。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，好氧发酵培养的温度为20～45℃，好氧发酵培养的时间为10～200小时。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述克雷伯氏肺炎杆菌是克雷伯氏肺炎杆菌CGMCC1.6366。