[发明专利]铁皮石斛优质试管苗限根培养方法及其培养容器

说明书

技术领域

　　本发明涉及一种兰科植物（特别是石斛属、兜兰属、兰属等）组织培养育苗方法，具体为在植物组织培养的定苗培养、壮苗生根阶段进行限根培养，是一种高科技育苗技术新型方法，属于生物工程技术领域植物组织培养技术领域。

背景技术

　　兰科是单子叶植物中的第一大科，其中许多种类具有重要的观赏价值、药用价值和食用价值。兰科植物的无性分蘖繁殖繁殖系数低，不适于人类的需求，其种子成熟时仅为一层种皮包裹胚性细胞团，无完整的胚结构，自然条件下有性繁殖系数也很低，为了满足人类生活和生产的需求只有通过组织培养的方法进行无性繁殖（取茎、芽、根、花等器官组培繁殖）或是种子瓶播繁育种苗，所有组培育苗过程都要经历一个将原球茎或小苗接种到壮苗生根培养基上进行壮苗使其形成具有健壮根系和一定高度植株的健壮试管苗，这时为了保证试管苗质量，培养容器内可培养的小苗数相对固定，这一过程称为定苗培养或叫壮苗培养。

　　目前国内通过组织培养技术进行工厂化育苗的有以铁皮石斛为首的石斛类、兜兰和兰属的兰科植物，传统定苗培养方法是将小苗全接种于一个培养瓶内，随着小苗逐渐长大，试管苗的根系缠绕在培养瓶底部，盘根错节的根错综复杂交结在一起，传统的兰花专用培养瓶，630ml的大瓶子，底部外径为9.6cm，上部出苗口外径为 4.9cm；采用直筒型的370ml组培瓶，出苗口稍大些，但是壮苗培养一段时间后，根系在底部盘结成一团，出瓶时极为不易，会对试管苗的根、茎、叶造成很大的损伤，大大的降低了移栽成活率；同时为了尽量减少出瓶对试管苗的损伤操作人员得细致出瓶；另外出瓶后清洗培养基的工作也得小心细致不损伤根系，这样耗费的时间增加，降低了出瓶的工作效率。

　　采用限根培养方法能够克服试管苗茁壮生长与出瓶之间的矛盾，试管苗移栽简单方便，试管苗受到损伤小，移栽后缓苗时间少，移栽成活率大大提高。

　　到目前为止没有人在组织培养中提出限根培养方法和设计专用容器。

发明内容

　　关于本发明的目的是为了解决铁皮石斛工厂化育苗中，定苗生根培养一段时间后小苗逐渐长大，试管苗的根系缠绕在培养瓶底部，盘根错节的根错综复杂交结在一起，出瓶时伤根、伤叶、费力费时的不良现象。本发明还设计了兰科植物限根培养的专用培养瓶。

　　本发明的目的可以通过以下技术方案来实现。

　　铁皮石斛优质试管苗限根培养方法，本发明的主要技术在提出了“限根培养法”这一新概念，并设计了专用培养容器，具体步骤如下：

1、播种：将铁皮石斛种子播种到萌发培养基上，诱导萌发得到原球茎。种子萌发及分化培养基MS + NAA (0.6-0.4）mg/L + 6-BA (0.15-0.05) mg/L+ 蔗糖30g/L +琼脂粉7.2g/L+椰子汁100 ml/L 。

　　2、成苗培养。将原球茎转入分化培养基上，培养3-4周，形成具有2-3条0.5 cm长的根，茎分化出2-3个节，具有3-4片小叶，植株高0.6-0.8cm的小苗。

　　3、限根培养。将较大的原球茎或分化小苗定植于装在限根培养容器中的壮苗生根培养基上进行限根培养，壮苗生根培养基为MS + NAA(1.0- 0.4) mg/L + 6-BA (0.1 -0.05) mg/L+ 蔗糖30g/L + 琼脂粉7.2 g/L+ 香蕉泥60 g/L，培养8至12周后小苗长大，根系茁壮但并不相互缠绕，出瓶时容易操作，非常方便。

　　4、试管苗移栽。将限根壮苗培养得到的优质小苗转入自然光照和温度的炼苗室或大棚中锻炼7天，然后打开瓶盖3-5天，取出试管苗洗净根部培养基，使表面水分阴至半干后栽培，以杉木碎块为栽培基质，保持适当的通风和空气湿度，在温度适宜时小苗缓苗期为两周，第三周后恢复生长，移栽成活率大于95%。

　　用于上述培养的容器：650ml的小口瓶分隔为25个区域，370ml的大口瓶均匀分隔为16个区域。区域高度为2.5-3 cm。根据情况，为了区域间的物质交流，隔层上可设计4-9个直径为0.1-0.15 cm的圆形小孔。

　　培养容器，其外形为常规的各种培养瓶，主要是制作时在其底部用与瓶子相同的材料做成相应具小孔分隔，既限制了根的生长范围又不阻碍各小苗根部间的生长有利物质交流。