[发明专利]一种白细胞分化抗原的干扰RNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种白细胞分化抗原14的干扰RNA及其表达序列的构建及应用。具体而言，本发明针对人肿瘤细胞表面分子白细胞分化抗原14基因的核苷酸序列设计合成shRNA，所述shRNA转入肿瘤细胞后能抑制白细胞分化抗原14的。

本发明涉及干扰一种CD14shRNA及其沉默的胃癌细胞MGC-803，的作用机制及sh-CD14稳定转染的细胞的制备方法，属于基因工程技术领域。

背景技术

胃癌是严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一。全球每年新发病例约98万人，占癌症患者总数的8％，其中约73万人死亡，占因癌症死亡人数的10％[Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin.2011，61(2)：69-90.]。

幽门螺杆菌(H.pylori，Hp)，已被确定为胃癌及胃粘膜相关淋巴瘤的第一类致癌原，它能够选择性的感染胃上皮细胞，在感染过程中其细胞壁组成成分脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)能够作用于细胞膜受体，在此过程中白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen14，CD14)为机体识别并结合LPS进行信号传递的第一步[Zanoni I，Ostuni R，Marek L R，et al.CD14controls the LPS-induced endocytosis of Toll-like receptor4[J].Cell，2011，147(4)：868-880.Van de Weg C A M，Koraka P，van Gorp E，et al.Lipopolysaccharide levels are elevated in dengue virus infected patients and correlate with disease severity[J].Journal of Clinical Virology，2012，53(1)：38-42.]。研究表明，幽门螺杆菌能够通过胃粘膜的细胞成分发送和接收信号从而维持宿主与病菌之间的动态平衡[Blaser MJ，Kirschner D.The equilibria that allow bacterial persistence in human hostsp[J].Nature，2007，449(7164)：843-849.]，同时，在幽门螺杆菌感染的组织尤其是胃癌组织中均检测到CD14和TLR4的异常高表达[Zhao D，Sun T，Zhang X，et al.Role of CD14 promoter polymorphisms in Helicobacter pylori infection-related gastric carcinoma[J].Clin Cancer Res，2007，13(8)：2362-2368]。CD14主要表达于外周血的单核细胞和组织中的巨噬细胞膜上，介导机体对LPS的识别、结合及激活单核巨噬细胞系统，引发炎症级联反应[WRIGHT SD，RAMOS RA，TOBIAS PS，et al.CD14，a receptor for complex of lipopolyaccharide and LPS binding protein[J].Science.1990，249(4975)：1431-1433.]。

RNA干扰是机体内广泛存在的一种双链RNA介导的序列特异性基因沉默现象[3]，因其具有沉默效率高、特异性强以及操作简便等优于传统基因敲除手段的优点而得到迅速发展，现成为生命科学领域中重要的研究工具。

CD14在胃癌发生发展中的作用还未见报道，本发明采用RNA干扰的方式对CD14基因表达进行沉默，筛选出稳定沉默的胃癌细胞株，探讨LPS刺激下CD14对胃癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制，为寻找胃癌的新的治理靶点提供重要的理论价值和实践意义。

本发明根据GenBank数据库中人源CD14的mRNA序列，构建了干扰载体，并筛选到了CD14稳定沉默的胃癌细胞株。通过裸鼠移殖瘤模型发现，该细胞株在LPS刺激后表现出显著的行为变化。该CD14沉默细胞株为研究LPS非CD14介导的胃癌细胞行为变化和幽门螺杆菌诱导胃癌发生提供了良好的研究材料。

发明内容