[发明专利]猪小肠复合抗菌肽的制备方法及用途

权利要求书

1.一种猪小肠复合抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

（1）将新鲜猪小肠用去离子水冲洗干净，去内容物、去浆膜和去脂后用注射用水彻底冲洗，然后冷冻剪碎，绞肉机初绞1-3次，再用胶体磨匀浆，制成匀浆液；

（2）将所述匀浆液反复冻融3-6次后，100℃隔水煮沸15-25min，然后迅速冷却后冷藏，冷藏温度为1-4℃，冷藏时间为0-5小时；

（3）在匀浆液中加入浓度为5.00%的乙酸溶液，搅拌浸提，4℃条件进行第一次离心，将第一次离心的上清液冷冻保存，所述浓度为5.00%的乙酸溶液用注射用水配制，所述乙酸溶液与匀浆液的体积比为1:1；

（4）在第一次离心的沉淀物中加入浓度为6.67%-5.00%的乙酸溶液，搅拌浸提，4℃条件进行第二次离心，将第二次离心的上清液冷冻保存，所述浓度为6.67%-5.00%的乙酸溶液用注射用水配制；

（5）在第二次离心的沉淀物中再加入浓度为8.75%-5.63%的乙酸溶液，搅拌浸提，4℃条件进行第三次离心，得到第三次离心的上清液，所述浓度为8.75%-5.63%的乙酸溶液用注射用水配制；

（6）合并上述三次上清液，将合并的上清液经0.1、0.22或0.45um切向流微滤膜过滤，收集微滤透过物，得到澄清液；澄清液经8或10KD切向流超滤膜过滤，收集超滤透过物，得到超滤液；调节超滤液pH值至6.5-7.5，得到猪小肠复合抗菌肽粗制品；

（7）将猪小肠复合抗菌肽粗制品经1或3KD切向流纳滤膜过滤浓缩和透析除盐，收集纳滤截留物；调节渗透压至280-320mosm/kg，再经0.1um的除菌过滤器除菌，即得猪小肠复合抗菌肽。

2.根据权利要求1所述的猪小肠复合抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）、（4）所述冷冻温度为-20℃以下，冷冻时间不超过30天；步骤（3）、（4）、（5）所述搅拌浸提为搅拌8-14小时，温度为1-6℃；步骤（3）、（4）、（5）所述离心时间均为15-25min，离心机转速为6000-8000rpm。

3.根据权利要求1所述的猪小肠复合抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述第一次离心沉淀物与乙酸溶液的重量/体积（W:V）为1Kg：0.6-1L。

4.根据权利要求1所述的猪小肠复合抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述第二次离心沉淀物与乙酸溶液的重量/体积（W:V）为1Kg：0.4-0.8L。

5.如权利要求1-4任一项所述方法得到的猪小肠复合抗菌肽。

6.如权利要求5所述的猪小肠复合抗菌肽的用途，其特征在于，猪小肠复合抗菌肽作为畜禽新型抗生素、免疫增强剂及免疫佐剂的用途。

7.根据权利要求5所述的猪小肠复合抗菌肽的用途，其特征在于，所述猪小肠复合抗菌肽单独或与疫苗联合免疫。

8.根据权利要求5所述的猪小肠复合抗菌肽的用途，其特征在于，所述猪小肠复合抗菌肽1-6mL单独或与猪传染性胃肠炎-流行性腹泻疫苗1-3头份联合免疫每头猪。

9.根据权利要求5所述的猪小肠复合抗菌肽的用途，其特征在于，所述猪小肠复合抗菌肽0.01-0.2mL单独或与鸡毒支原体疫苗1-3羽份联合免疫每羽鸡。