[发明专利]一种杂交兰组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于组织培养快速繁殖技术领域，具体涉及一种杂交兰组织培养快速繁殖方法。

背景技术

杂交兰是通过大花蕙兰与国兰人工杂交选育出的一类新型兰花。杂交兰的花朵大小、株高、株型、叶片大小等性状介于大花蕙兰和国兰之间，具有很高的观赏价值，市场前景广阔。从近几年的年宵花行情看，杂交兰供不应求，一些精品杂交兰价格高昂，有的甚至卖到每盆几千元，但当前杂交兰的供应主要依靠进口。因此，进行杂交兰组织培养快速繁殖研究，提高种苗繁殖速度，对杂交兰的推广应用，以及满足市场的需求具有十分重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供了一种杂交兰组织培养快速繁殖方法，通过丛生芽的途径进行鼓槌石斛组织培养能够获得大量遗传性状稳定的试管苗，保持良好的亲本特性，并且具备包括不变性、投入少、产出高、周期短在内的诸多优势。

本发明通过以下技术方案来解决上述技术问题：

一种杂交兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

1）外植体的消毒：取当年生生长健壮、高5～15cm的新芽，将新芽由母株最基部的地方切下，去除杂质和上端已展开的叶，只留下总长度约4～5cm的芽体，流水冲洗20min，在超净工作台上用酒精和0.1% HgCl₂溶液进行处理实现一次消毒，而后再用无菌水冲洗5～8次，然后用镊子小心逐片剥去包住的外被，直至露出侧芽，将有侧芽的茎段截下，再用0.1% HgCl₂溶液灭菌6～8min进行二次消毒，再用无菌水冲洗5～8次，无菌滤纸吸干残余水分,并接种到诱导培养基上；

2）丛生芽的诱导：采用诱导培养基培养15～20天，侧芽变绿增大；再经30～40天，新芽形成并生长；培养过程中，光照强度2000～2500lx，光照10～12小时/天，温度25～28℃；

3）丛生芽的增殖：利用侧芽培养得到的丛生芽，剪取部分叶片后转移到丛生芽增殖培养基，培养40～60天，获得增殖倍数为4.0～6.0的增殖丛生芽；培养条件为：光照强度2000～2500lx，光照10～12小时/天，温度25～28℃；

4）继代培养：采用继代培养基进行继代培养，每40～60天继代增殖1次，并将继代次数控制在15次以内；培养条件为：光照强度2000～2500lx，光照10～12小时/天，温度25～28℃；

5）生根培养：当继代苗达到合适数量后，采用生根培养基进行生根壮苗培养，培养40～60天得到生根苗。培养条件为：光照强度2000～2500lx，光照10～12小时/天，温度25～28℃；

6）试管苗移栽：选择每年3～5月为出瓶移栽的季节，或者提供类似3～5月份自然条件的生长环境进行出瓶移栽；移栽前，试管苗放置于具自然光散射的温室中炼苗10-20天，然后从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，并放于高锰酸钾溶液中浸泡3-5分钟，取出后用进口水苔种植于口径4-6cm的塑料杯盆中；保持温室通风，湿度在70～80%，温度保持在15℃以上至室温范围内，高于30℃必须用风机、水帘降温。

优选地，所述诱导培养基成分为1/2MS+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤) 1.0～3.0㎎/L+NAA(萘乙酸) 0.05～0.10㎎/L+10.0～20.0%椰子汁+3.0～5.0g/L活性炭；培养基含糖30g/L，琼脂0.7%，PH值5.5-5.8。

优选地，所述丛生芽增殖培养基为1/2MS+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤) 1.0～3.0㎎/L+AD(腺嘌呤) 1.0～3.0㎎/L+10.0～20.0%椰子汁+3.0～5.0g/L活性炭。

优选地，所述继代培养基为1/2MS+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤) 1.0～3.0㎎/L+AD(腺嘌呤) 1.0～3.0㎎/L+10.0～20.0%椰子汁+3.0～5.0g/L活性炭。

优选地，所述生根培养基成分中含有1/2MS+NAA(萘乙酸) 0.5～1.0㎎/L+10.0～20.0%椰子汁+3.0～5.0g/L活性炭。

优选地，所述外植体的消毒步骤中，在超净工作台上用酒精和0.1% HgCl₂溶液进行处理实现一次消毒是指超净工作台上先用酒精清洗表面，并在75%的酒精中浸泡15-45s，用0.1% HgCl₂溶液灭菌8～10min。

优选地，所述试管苗移栽中，用于浸泡小苗根部的高锰酸钾溶液为0.1%的高锰酸钾溶液。