[发明专利]一种硫酸鱼精蛋白效价测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说涉及硫酸鱼精蛋白效价的测定。 

背景技术

《中国药典》2010年版附录VII J硫酸鱼精蛋白生物测定法，详述了硫酸鱼精蛋白效价的测定方法，通过兔血浆凝结状况来判定其效价。具体操作方法如下： 

(1)肝素标准品溶液的配制称取肝素标准品适量，按效价加0.9％氯化钠溶液溶解使成几种不同浓度的溶液。 

(2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制称取硫酸鱼精蛋白，加0.9％氯化钠溶液，制成1mg/ml的溶液。 

(3)检定法取小试管8支，第1管和第8管为空白对照管，加入0.9％氯化钠溶液0.2ml，第2～7管为供试品管，每管加入硫酸鱼精蛋白溶液0.1ml，再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液0.1ml，立即混匀。然后分别于上述各管中加入0.7ml的血浆，置37±0.5℃恒温水浴中预热5～10分钟，每管分别加入1％氯化钙溶液0.1ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间。观察并记录各管凝结时间。 

结果判断两支对照管的凝结时间相差不得超过1.35倍。在供试品管的凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间150％的各管中，以肝素浓度最高的一管作为终点管。同样重复5次，5次试验测得终点管的肝素浓度，相差不得大于10个单位。5次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白1mg中和肝素的单位数。 

检验中使用的兔血浆或是亲自制备，或是花昂贵的价格购买，市场上血浆的价格约为10元/支，每支0.5ml，测定一个硫酸鱼精蛋白样品，重复5次，至少60支兔血浆，600多元钱，检验成本很高。另外，操作复杂，耗时间长。 

发明内容

本发明的目是提供了一种硫酸鱼精蛋白效价测定方法。 

具体地，本发明的目的是提供的硫酸鱼精蛋白效价测定方法，不适用兔血浆，检验实惠、操作方便、快捷。 

本发明采用以下测定方法方案予以实现上述目的： 

(1)肝素标准品溶液的配制称取肝素标准品，加0.9％氯化钠溶液溶解使成不同效价浓度的肝素标准品稀释液。 

(2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制称取硫酸鱼精蛋白，加0.9％氯化钠溶液，稀释成1mg/ml的溶液。 

(3)检定法取试管，每管加入硫酸鱼精蛋白溶液，再每管加入等体积的一种浓度的肝素标准品稀释液，静置，取上清液，550nm波长下，测定每管混合液的透光率。 

透光率最高管的肝素标准品的效价浓度数，即为硫酸鱼精蛋白的效价。 

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果： 

经过多次实验，本发明测定的硫酸鱼精蛋白的效价，与《中国药典》2010年版规定的硫酸鱼精蛋白生物测定法所测得的效价完全一致。但进行对比发现，本发明的优势在于①使用的实验试剂少，不需要兔血浆、氯化钙，实验成本低，；②操作快捷、时间短；③实验所需的仪器少，不需要水浴锅、秒表等。 

具体实施方式

实施例1： 

(1)肝素标准品溶液的配制 

称取肝素标准品150.05mg，单位效价180iu/mg，加0.9％氯化钠溶液溶解使之成为不同效价浓度的肝素标准品稀释液各25ml，效价浓度分别为145iu/ml，150iu/ml，155iu/ml，160iu/ml，165iu/ml，170iu/ml。 

(2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制 

称取硫酸鱼精蛋白122.52mg，批号110901，加0.9％氯化钠溶液，稀释成1mg/ml的溶液。 

(3)检定法 

取试管6支，每个试管中加入硫酸鱼精蛋白溶液5ml，再在各个试管中分别加入5ml的对应浓度为145iu/ml，150iu/ml，155iu/ml，160iu/ml，165iu/ml，170iu/ml肝素标准品稀释液，静置，取上清液，500nm波长下，测定每管混合液的透光率，重复3次。 

结果见下表： 

通过透光率检测，肝素标准品的效价浓度155iu/ml管的透光率最高，即为硫酸鱼精蛋白的效价为155iu/mg。 

(4)现有检定法