[发明专利]改进无固定点靶物质的青霉素类抗生素适配体及其应用

权利要求书

1.一种青霉素类抗生素适配体，其特征在于，该青霉素类抗生素适配体长度为68bp，序列如Seq ID No.1所示，该适配体的二级结构为茎环结构，其分子结构如下：

2.根据权利要求1所述的适配体的应用，其特征在于，用于开发青霉素类适配体传感器，该传感器由青霉素类抗生素适配体、阳离子电解质和纳米金溶液组成；在520nm和650nm处的光吸收比值与6-APA浓度成正比。

3.根据权利要求2所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述传感器通过将6-APA溶液依次与青霉素类抗生素适配体溶液、纳米金溶液以及阳离子电解质混合制成；

所述的6-APA溶液的浓度范围为：0.2-2μM；

所述的青霉素类抗生素适配体溶液的浓度范围为：1-20nM；

所述的纳米金溶液是指：将3.5mL1.0wt%的次氯酸加入至10.5mL1.0%的柠檬酸三钠溶液中，加热搅拌30分钟后，不加热搅拌至溶液颜色由灰色变为亮红色，置成纳米粒径为15nm的纳米金溶液，保存至4℃冰箱；

所述的阳离子电解质的浓度范围为：0.084-0.158nM；

所述的阳离子电解质是指：聚二烯丙二甲基胺。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的青霉素类抗生素适配体溶液的浓度为6nM；所述的阳离子电解质的浓度为0.1121nM。

5.根据权利要求3所述的青霉素类适配体传感器的检测方法，其特征在于，所述方法通过以下方式实现6-APA浓度检测：

第一步、制备已知浓度的6-APA检测体系：取9支包含青霉素类抗生素的核酸适配体与纳米金混合液的PE管，在25℃条件下孵育15分钟；然后分别加入10μL不同浓度6-APA标准液，使得整个检测体系中的6-APA含量维持在0.01–5μM之间，充分混匀后再将PE管置于25℃条件下孵育15min；

第二步、另取1支包含青霉素类抗生素适配体和缓冲溶液的PE管，加入10μL超纯水，制成空白对照体系溶液；

第三步、向10支PE管中分别加入100μL纳米金溶液，充分混匀后再将PE管置于25℃条件下孵育15min；然后向上述孵育完的10支PE管中分别加入0.1121nM的PDDA，充分混匀后再将PE置于25℃条件下孵育5min。

第四步、通过拟合酶标仪测得第三步步骤后各溶液的650nm和520nm处吸光值的比值之差，并制作得到光吸收差值标准曲线用于检测6-APA浓度。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的空白对照体系溶液的组分为：将6nM青霉素类抗生素适配体在超纯水中孵育15分钟后，加入100μL纳米金，再加入浓度为0.1121nM的PDDA反应5分钟。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的光吸收差值标准曲线是指：将不同浓度6-APA作为横坐标，以检测体系以及空白对照液用酶标仪测定得到的650nm和520nm处光吸收值的比值之差为纵坐标绘制标准曲线，得到公式y=7843.9x-3.0572，R²=0.996。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的6-APA浓度通过以下方式实现检测：取6nM青霉素类抗生素的核酸适配体，加入200μL纳米金溶液，孵育15分钟后，加入待测样品反应15分钟，再加入0.1121nM PDDA反应5分钟后，酶标仪检测溶液650nm和520nm处吸光值的比值之差。代入标准曲线计算公式，换算出待测样品中6-APA浓度。