[发明专利]黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖科学技术领域，涉及一种鱼类雌核发育诱导方法，是用遗传失活的黄姑鱼（Nibea albiflora）精子诱导鱼类卵子雌核发育，特别是涉及一种黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法。

背景技术

雌核发育是指卵子只依靠本身的遗传物质发育成为个体的现象，它需要同种或异种精子进入卵内，但这些精子只起激动作用并不参与发育，胚胎发育完全是在雌核的控制之下进行的，因此得到的后裔全部是母性性状，基因型与母本相同或略有差异。人工诱导雌核发育是加速鱼类优良基因纯合化、使优良的遗传性状得以迅速固定，从而实现快速育种的最有效方法之一，同时也是进行鱼类遗传分析与性别控制的有效辅助手段；已经被广泛应用于国内外许多种鱼类遗传育种的研究与实践。例如王志勇等已经利用雌核发育技术培育出遗传纯合度很高的大黄鱼品系，并用于良种选育，培育出大黄鱼“闽优1号”新品种；通过诱导雌核发育大黄鱼性反转产生生理性雄鱼，再与雌鱼配组繁殖，培育出遗传全雌大黄鱼，也已应用到生产实践。刘海金等利用雌核发育技术培育出性状优良的雌核发育系，通过性反转与未反转的雌核发育系杂交配组，培育出生产性能优越的新品种牙鲆“北鲆1号”，取得了良好的经济和社会效益。

黄姑鱼是我国一种重要的海水养殖鱼类，而且其雌性生长明显优于雄性，通过人工诱导黄姑鱼雌核发育可产生只具有母本基因的全雌群体，在其遗传与育种研究中具有重要而广泛的应用价值。然而，目前黄姑鱼人工雌核发育的研究尚属空白。尽管目前国内外已经有很多种鱼类人工雌核发育诱导技术的报道，但是，不同的物种所需要采用的精子稀释液、精子遗传灭活所需要的紫外线等的照射剂量、诱导雌核发育单倍体染色体组二倍化开始处理时间、持续时间等往往也有很大差异，因此需要针对每一个物种进行一系列实验摸索进行确定。本发明针对黄姑鱼的生理和繁殖特性，采用权利要求书中所述的方法和步骤，能够成功诱导出黄姑鱼雌核发育二倍体，用于遗传育种研究与实践，其特点是方法简单，成本低，实用性强，而且可以避免采用异源精子（即不同物种的精子）诱导所可能导致的不同物种基因污染黄姑鱼基因库的问题（黄姑鱼的养殖方式是海区网箱养殖或滩涂池塘养殖，在养殖过程中不可避免会产生养殖个体逃逸进入自然海区，如果雌核发育黄姑鱼带有异源精子的遗传物质，将难以避免对分布于自然海区的黄姑鱼种群造成基因污染）。本发明在黄姑鱼良种培育和遗传学研究上将发挥出重要的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单、成本较低、实用性较强，可以避免不同物种基因污染的黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，用于黄姑鱼良种选育和相关的遗传学研究。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为： 

本发明是一种黄姑鱼雌核发育二倍体的诱导方法，它包括以下步骤：

1) 黄姑鱼精子的遗传失活：取黄姑鱼精液经精子稀释液稀释20-30倍后，调整厚度至0.5-1 mm，置于紫外灯下照射，紫外线照射剂量为200-300mw/cm²；

2) 卵子雌核发育的启动：取黄姑鱼卵子与经步骤1)遗传失活的黄姑鱼精液混合后，加入室温海水，启动黄姑鱼卵子的雌核发育；

3) 卵子染色体组加倍：通过冷休克处理抑制第二极体排放，诱导黄姑鱼卵子的雌核发育单倍体的染色体组加倍成为雌核发育二倍体。

步骤1）中所说的精子稀释液的配制方法为：NaCl 7.896g、KCl 0.396g、MgSO₄·7H₂O 0.195g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.054g、KH₂PO₄ 0.054g、NaHCO₃ 0.305g、C₆H₁₂O₆ 0.99g，加水定容至1L。

步骤2）中遗传失活黄姑鱼精液与黄姑鱼卵子的比例为1mL：2-20g。

在步骤3）中所说的冷休克处理中抑制第二极体排放方法是：黄姑鱼卵子启动后1-5min，转移到0-6℃海水中，静置5-20min，再转移到室温海水中孵化。