[发明专利]通过无血清培养扩增活化淋巴细胞的方法有效
| 申请号： | 201310334666.6 | 申请日： | 2013-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN103436492A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 邵谊 | 申请（专利权）人： | 北京赛诺泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京永新同创知识产权代理有限公司 11376 | 代理人： | 程大军;栾星明 |
| 地址： | 100071 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通过 血清 培养 扩增 活化 淋巴细胞 方法 | ||
1.一种通过无血清培养扩增活化淋巴细胞的方法，所述方法包括：
a)淋巴细胞活化步骤，其中将含有淋巴细胞的生物学样品与包被于培养容器上的淋巴细胞活化剂相接触并在无血清培养基中培养3-6天；
b)第一扩增步骤，其中向步骤(a)中获得的培养物加入其体积0.8-1.2倍的无血清培养基，进一步培养1-3天；
c)第二扩增步骤，其中向步骤(b)中获得的培养物加入其体积1-1.5倍的无血清培养基，进一步培养1-3天；
d)第三扩增步骤，其中向步骤c)中获得的培养物添加其体积2-4倍的无血清培养基，进一步培养4-6天；
e)第四扩增步骤，其中向步骤d)中获得的培养物添加其体积0.5-1.5倍的无血清培养基，进一步培养4-6天；和
f)收获步骤(e)中获得的扩增的活化淋巴细胞。
2.权利要求1的方法，其中所述淋巴细胞活化剂是抗CD3抗体。
3.权利要求1或2的方法，其中步骤(a)-(e)中使用相同的无血清培养基。
4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述无血清培养基还含有细胞因子。
5.权利要求4的方法，其中所述细胞因子包括IL-2、IL-7以及INF-γ。
6.权利要求5的方法，其中所述无血清培养基中IL-2的浓度是750-1500U/ml，优选1000U/ml。
7.权利要求5的方法，其中所述无血清培养基中IL-7的浓度是10-30U/ml，优选20U/ml。
8.权利要求5的方法，其中所述无血清培养基中INF-γ的浓度是750-1500U/ml，优选1000U/ml。
9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述无血清培养基选自X-VIVO15、TexMACS和IMSF100培养基。
10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述淋巴细胞被扩增100-1000倍。
11.权利要求1-9任一项的方法，其中被扩增后的淋巴细胞主要是CD8+T细胞。
12.权利要求1-9任一项的方法，其中所获得的扩增的活化淋巴细胞的活力可以保持至少12小时。
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