[发明专利]一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法

权利要求书

1.一种用双功能量子点传感体系检测乙酰胆碱酯酶AChE活性的方法，其特征在于双功能量子点传感体系包括的巯基乙酸TGA修饰的双功能发光纳米材料碲化镉CdTe量子点QD、硫代乙酰胆碱ATCh、pH7.5的三羟甲基氨基甲烷Tris-盐酸HCl缓冲液，利用传感体系测定AChE的活性的方法步骤如下：将10μL新配的溶于生理盐水的AChE，加入190μL溶有ATCh和QD的，浓度为0.0001～0.0050M的Tris-HCl缓冲液，混匀后样品在35～40℃孵育8～12min后进行荧光检测，所使用的QD合成时Cd²⁺与TGA的摩尔比为1∶0.75～1.75，体系中ATCh和QD的终浓度分别为200～400μM和200～600nM，激发波长350～420nm，扫描范围420～680nm，以波峰处对应发光强度作为采集信号，每个浓度平行测定3份，检测限按3倍空白标准偏差法计算。

2.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的pH缓冲液配制步骤如下：配制0.2M不同pH缓冲液的醋酸钠NaAC-醋酸HAC，pH区间范围为3.5～6.5；配制0.05M不同pH缓冲液的Tris-HCl，pH区间范围为7.0～9.0。

3.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的不同Cd²⁺与TGA摩尔比所合成的TGA-CdTe QD对氢离子的响应步骤如下：将所合成的不同Cd²⁺与TGA摩尔比的CdTe QD用不同pH配制溶液，QD浓度均保持一致，测定荧光信号，比较不同Cd²⁺与TGA摩尔比的TGA-CdTe QD对氢离子响应能力。

4.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的不同Cd²⁺与TGA摩尔比所合成的TGA-CdTe QD对巯基基团的响应步骤如下：将所合成的不同Cd²⁺与TGA摩尔比的CdTe QD与不同浓度的巯基乙醇反应，测定荧光信号，比较Cd²⁺与TGA摩尔比的TGA-CdTe QD与巯基基团响应能力，反应体系为水，QD浓度均保持一致。

5.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的pH7.5的Tris-HCl缓冲液浓度确定步骤如下：用0.05M的NaOH调生理盐水溶液pH为7.5，以此生理盐水溶液配制QD和硫代乙酰胆碱的混合溶液和酶溶液，再加入pH为7.5的不同浓度的Tris-HCl，随后加入5M的NaCl溶液，最后加入酶溶液，37℃孵育10min后，测定荧光信号，对照组不加AChE，以Tris-HCl溶液替代。

6.如权利要求1所述的一种用双功能量子点传感体系测定乙酰胆碱酯酶活性的方法，其特征在于所述的双功能传感体系的TGA-CdTe QD合成包括如下步骤：称量CdCl₂溶解于蒸馏水后，加入NaCl，分别再加入TGA，使得Cd²⁺与TGA的摩尔比为1∶0.75～1.75，调整体系离子强度为0.001～0.150mM，使用0.1M的NaOH将溶液pH调节至10.5～11.6，通入N₂30～60min以除氧，然后快速注入新合成碲氢化钠NaHTe前驱体，使Cd²⁺∶NaHTe摩尔比例为1∶0.25～0.75，溶液于N₂保护下100℃回流4～8hr获得QD，对合成后溶液中存在的沉淀，通过0.45μm的滤膜抽滤去除后，双功能TGA-CdTe QD通N₂保存。