[发明专利]一种白念珠菌SMT3基因的用途及缺失SMT3基因的白念珠菌减毒株

权利要求书

1.白念珠菌SMT3基因的用途，为用于制备SMT3基因不表达的白念珠菌smt3/smt3缺失株，或者用于制备、筛选白念珠菌治疗药物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，SMT3基因含有如SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，SMT3基因在白念珠菌中编码泛素相关小修饰蛋白。

4.一种白念珠菌减毒株，为白念珠菌smt3/smt3缺失株，所述减毒株中SMT3基因不表达。

5.如权利要求4所述的白念珠菌减毒株，其特征在于，所述白念珠菌减毒株为泛素相关小修饰蛋白基因缺失株。

6.如权利要求5所述的白念珠菌减毒株，其特征在于，所述泛素相关小修饰蛋白含有SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列。

7.如权利要求4所述的白念珠菌减毒株，其特征在于，所述白念珠菌smt3/smt3缺失株中，SMT3基因通过同源重组的方法敲除。

8.权利要求4-7任一权利要求所述白念珠菌减毒株的构建方法，为通过同源重组的方法对白念珠菌中SMT3基因的两个拷贝进行了敲除，具体步骤如下：

1）SMT3基因第一个拷贝的敲除：采用SEQ ID NO：1-2所示序列的引物从白念珠菌野生型菌株基因组DNA中扩增SMT3的上游序列片段，利用XhoI＋PstI酶切连接到载体pCUB6中，得到质粒pKO-SMT3Up；然后以SEQ ID NO：3-4所示序列的引物从白念珠菌野生型菌株基因组中扩增得到SMT3的下游序列Ⅰ，以BamHI＋NotI酶切连接到前述pKO-SMT3Up中，得到敲除质粒pSMT3KOⅠ；将所述敲除质粒pSMT3KOⅠ酶切后转化白念珠菌，经细胞内同源重组得到第一拷贝SMT3敲除的单敲除菌株；

2）SMT3基因第二个拷贝的敲除：采用SEQ ID NO：1-2所示序列的引物从白念珠菌野生型菌株基因组DNA中扩增SMT3的上游序列片段，利用XhoI＋PstI酶切连接到载体pCUB6中，得到质粒pKO-SMT3Up；然后以SEQ ID NO：3、5所示序列的引物从白念珠菌野生型菌株基因组中扩增得到SMT3的下游序列Ⅱ，以BamHI＋NotI酶切连接到前述pKO-SMT3Up中，得到敲除质粒pSMT3KOⅡ；将所述敲除质粒pSMT3KOⅡ酶切后转化白念珠菌，经细胞内同源重组得到第二拷贝SMT3敲除的smt3/smt3双敲除菌株。

9.权利要求4-7任一权利要求所述白念珠菌减毒株在研究白念珠菌生长及毒性功能中的应用，或者在制备或筛选白念珠菌治疗药物中的应用。

10.一种制备白念珠菌治疗药物的方法，为以白念珠菌中的SMT3基因为靶标，沉默SMT3基因的表达。