[发明专利]CDKL1基因及其siRNA和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种CDKL1基因的小分子干扰核糖核酸标靶DNA，抑制CDKL1基因表达的siRNA的核苷酸序列、编码所述siRNA的重组载体及其在制备和筛选抗癌的药物中的用途。

背景技术

胆囊癌是胆道系统中最常见的恶性肿瘤，占消化系统恶性肿瘤的第五位，早期胆囊癌无特异性的临床表现，大多数患者发现时已处于进展期，进展期胆囊癌手术后的预后很差，5年存活率仅为5%。导致胆囊癌患者术后生存期短的主要原因在于术后的复发和转移。目前临床上没有可以用于判断胆囊癌患者术后转移的分子靶标，也没有可以用于治疗肿瘤细胞转移的潜在的靶向药物治疗靶点。

CDKL1(cyclin-dependent kinase-like1(CDC2-related kinase))是细胞周期蛋白依赖性激酶样蛋白1。该蛋白最早在1992年被报道，Meyerson等设计了针对cdc2蛋白的保守序列的简并引物，通过PCR的方法，从cDNA文库中鉴定出7个新的cdc2相关激酶（cdc2related kinase）。其中一个被称为KKIALRE的分子后来被命名为CDKL1(M Meyerson,GH Enders,CL Wu,LK Su,C Gorka,C Nelson,E Harlow,LH Tsai:A family of human cdc2-related protein kinases.EMBO J1992,11:2909-17)。

关于CDKL1分子的功能，目前了解地非常少。已有报道Cdc2在细胞周期中，调控细胞进入S期(M Pacek,TA Prokhorova,JC Walter:Cdk1:unsung hero of S phase?Cell Cycle2004,3:401-3)，尽管和cdc2的结构具有较高的相似性，但是到目前为止CDKL1是否参与细胞周期调控仍然未知。通过对CDKL1结构的分析，CDKL1含有一个保守的MAP激酶双磷酸化结构域（MAP kinase dual phosphorylation motif）。该分子可以被表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）激活且整个过程不需要磷酸化。另外，通过对于脑内CDKL1的免疫组化实验研究，发现该分子主要是一个分布在胶质内的蛋白，它的主要功能可能是影响胶质细胞生成(SH Yen,A Kenessey,SC Lee,DW Dickson:The distribution and biochemical properties of a Cdc2-related kinase,KKIALRE,in normal and Alzheimer brains.J Neurochem1995,65:2577-84)。

RNA干扰现象（RNA interference，RNAi）是细胞内自主产生的生物进化过程中一项保守的防御机制。siRNA被认为是RNA干扰的主要效应物，已成为一种通过抑制目的基因的表达来研究哺乳动物基因功能的有效工具。直接转染合成的siRNA能特异性抑制动物细胞内同源基因的表达，但是细胞内siRNA很容易降解，因此这种方法不能实现稳定的RNA干扰。慢病毒载体在动物细胞内感染效率高，免疫原性低，且既能感染分裂期的细胞又能感染非分裂期的细胞。由于病毒载体的这些特性，慢病毒介导RNA干扰能在各类动物细胞内长期稳定地表达siRNA，抑制基因表达，因此该方法具有高效、稳定、特异性强、适用范围广的特定，已成为RNA干扰技术的主要研究工具。RNA干扰技术在生物医药上的应用为临床肿瘤的应用基础研究增加了强有力的手段。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对目前临床上肿瘤病人的预后很差，手术后生存期很短，同时缺乏有效的预测肿瘤原发耐药的分子诊断标记物和治疗肿瘤原发耐药的分子靶点的问题，提供一种有效抑制CDKL1基因表达的siRNA分子，所述siRNA分子作用的标靶DNA及其在制备或筛选抗肿瘤药物中的应用。

本发明解决上述技术问题采取的技术方案之一是：一种分离的CDKL1基因小分子干扰核糖核酸标靶DNA，其中所述标靶DNA是：

（1）CDKL1编码基因上的连续15～27个核苷酸组成的DNA；

（2）序列如SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4中任意一条所示的DNA；或

（3）与（1）或（2）所述的DNA在严紧杂交条件下杂交的多核苷酸组成的DNA，或者与其互补的DNA。