[发明专利]一种腺萼马银花组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及杜鹃花科杜鹃花属中腺萼马银花的快速繁殖方法。

背景技术

腺萼马银花（Rhododendron bachii Levl），为杜鹃花科杜鹃花属马银花亚属马银花组，别名石壁杜鹃，为中国特有种，常绿灌木，自然分布于安徽、浙江、江西、湖北、湖南、广东、广西、 四川和贵州。该野生种花茂叶繁，易于引种驯化，适应性强，在园林绿化中具有较大潜力。

对腺萼马银花的繁殖方法未见有研究，一般采取种子繁殖或扦插的方法。在同一亚属同组中的马银花种中，繁殖方法主要依赖于种子繁殖，但种子繁殖方法生产的植株需要很多年才能开花，且前期生长速度慢。有一种发明专利报道了马银花扦插繁殖的方法（杨华，一种马银花扦插繁殖的方法，专利号201210007679），扦插成活率从原15%提高了50%。但对腺萼马银花的种子繁殖、扦插方法均未见有报道，更未见通过组培方法快速繁殖腺萼马银花的方法。

组培快繁技术是实现对腺萼马银花大规模繁殖的重要途径，可以减少对野生资源的破坏，加快原生杜鹃的驯化进程及园林上的应用。本发明针对腺萼马银花植物学特征，利用已开花的母株茎段为外植体，建立了高效的组培快繁体系，其培育的组培苗生长健壮，继代周期短，国内未见有对腺萼马银花组培成功的报道。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明的一个目的是建立一种有效的腺萼马银花组培快繁方法，并利用此方法进行快速低成本生产组培苗，为腺萼马银花的组培苗工厂化生产提供技术支撑。本发明的另外一个目的是提供一种腺萼马银花组培快繁培养基。

为了实现上述的第一个目的，本发明通过以下技术方案来实现。

一种腺萼马银花组织培养快速繁殖方法，该方法按如下步骤进行：

1）外植体的选择：春季从已开花腺萼马银花母株上剪取带有潜伏芽的新发枝条；

2）外植体灭菌：剪去枝条叶片，先用自来水浸泡并冲洗10-20分钟，用洗洁精洗涤1-2次后吸干；然后，在无菌室超净台上用75%酒精消毒15-30秒，用无菌水冲洗3-5遍，再用0.1％氯化汞消毒8-12分钟，最后用无菌水冲洗3-5遍后吸干；

3）腋芽诱导培养：将灭好菌的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成2-3cm长的茎段，每段带有1-2个腋芽，斜插入诱导培养基中；于23-26℃光16小时，黑8小时，培养3-5周后，茎段潜伏芽发育生长出新枝条至2-4cm长；所述的诱导培养基由以下的组分构成：WPM或Anderson基本培养基 + ZT 1.0-2.0 mg/L + NAA0.05-0.1 mg/L + 20 g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH4.8-5.2，高温灭菌；

4）增殖培养：剪取新长出的枝条，去顶芽后插入增殖培养基中，于23-26℃光16小时，黑8小时，培养6-8周后，茎段长出丛生芽；此阶段可重复进行；所述的增殖培养基由以下的组分构成： WPM或Anderson基本培养基 + ZT 1.0-2.0 mg/L + NAA 0.05-0.1mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH 4.8-5.2，高温灭菌；

5）壮苗培养：将长到1-2cm长的丛生芽剪切移入壮苗培养基中，于23-26℃光16小时，黑8小时，培养2-4周，待长到3-5cm后移入基质中，进行瓶外生根；所述的壮苗培养基由以下的组分构成：WPM或Anderson基本培养基+ ZT 0.5-1.0 mg/L + NAA0.05-0.1 mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH 4.8-5.2，高温灭菌；

6）瓶外生根：在每年10至次年3月，将长到3-5 cm高的瓶苗在室外放置1周，洗去枝条上的琼脂后移入含有含泥炭：珍珠岩：蛭石体积比2：1：1的基质中，在保湿保温条件下生长，1-2个月后生根。

为了实现上述的第二个目的，本发明通过以下技术方案来实现。

一种腺萼马银花组织培养快速繁殖培养基，该培养基由以下的组分构成：WPM或Anderson基本培养基 + ZT 0.5-2.0 mg/L + NAA0.05-0.1 mg/L + 20 g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH4.8-5.2。

作为优选，该培养基由以下的组分构成：WPM或Anderson基本培养基 + ZT 1.0-2.0 mg/L + NAA 0.05-0.1mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH 4.8-5.2。