[发明专利]眼内抗原免疫联合内毒素诱导的动物模型及其建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种眼内抗原免疫联合内毒素诱导的动物模型及其建立方法，属于自身免疫性疾病模型的建立和研究领域。 

背景技术

葡萄膜炎，特别是葡萄膜视网膜炎常累及葡萄膜、视网膜、视网膜血管及玻璃体，且多发生于青壮年，并可反复发作，是一种种类繁多、病因复杂多样的眼科常见致盲疾病之一。其病因和发病机制尚不完全清楚。近二三十年来，利用视网膜抗原和/或细菌成分建立了多种葡萄膜炎的动物模型，包括EIU（endotoxin-induced uveitis）和EAU（experimental autoimmunity uveoretinitis），为探索和研究葡萄膜炎的病理损害及其机制发挥重要作用（Immunol Cell Biol, 1998 , 76(6):497-512）。 

然而，这些模型在模拟人类葡萄膜炎的发病环境或病程上和人类葡萄膜炎的致病环境和发病过程存在许多差异，如：EIU起病快、病程短、炎症消散迅速，与人类葡萄膜炎的病程长、易慢性化、易复发的特点形成显著差别(眼科研究, 2009, 27（5）：374-379)；EIU的病理损害主要是眼前节的虹膜睫状体部的中性粒细胞和单个核细胞渗出和浸润为主(Invest Ophthalmol Vis Sci, 1983, 24(2):196-202)。对EIU诱发细胞因子反应的研究表明， 这些炎性因子均为天然免疫的促炎因子（Immunol Cell Biol, 1998, 76(6):497-512），而且EIU小鼠脾脏淋巴细胞对眼部的抗原或多肽抗原刺激无增殖反应，以上这些EIU的这些炎症反应和病理特征以及EIU起病急，病程短、消散快等一过性的病程特点，均表明EIU的病理损害均属于非特异性炎症反应，而不是由自身抗原引发的自身免疫性疾病。 

同时，传统EAU模型不仅需要CFA（弗氏完全佐剂），而且需要百日咳毒素（Pertussis toxin，PTX）等罕见致病原作为辅助佐剂才能诱导成功(Methods Mol Med, 2004, 102:395-419)，这种需要PTX的传统EAU模型与人类葡萄膜炎的流行病学和发病环境有明显差异，以其作为人类自身免疫性葡萄膜视网膜炎的病因学和致病机理研究模型可能会产生偏差（Invest Ophthalmol Vis Sci, 1999, 40:2898–2905）。而且，PTX是一种具有多效性的佐剂，它不仅具有对血管内皮细胞的组胺致敏作用，破坏血眼屏障，增加血管的通透性，而且PTX在体内具有强烈促白细胞（淋巴细胞）增多 和增强T细胞的Th1反应作用（Invest Ophthalmol Vis Sci, 1999, 40:2898–2905）；然而，PTX也对趋化因子和粘附分子具有抑制作用，可抑制效应淋巴细胞向靶组织的迁移和炎性细胞的招募，从而抑制EAU的诱导（J Immunol. 2001;167(1):250-6.）。因此，PTX在EAU的作用是抑制作用和促进作用是综合作用是结果，其作为辅助佐剂时，不仅需要优化使用剂量，而且严格的限定时间。此外，PTX的体内研究表明，可增加IgE和IgG1的分泌，改变T细胞、B细胞的分布。微量的PTX即可产生强烈的生物学效应，而且持续时间长，如致组胺的超敏状态甚至可延续至84天（Infect Immun. 1981 Sep;33(3):820-6.）。总之，由于PTX生物活性的多向性，其对免疫系统产生的影响广泛而持久，PTX作为佐剂增强EAU的作用是多种生物效应综合作用的结果，因此以PTX作为辅助佐剂，可能对EAU本身的自身免疫反应机制造成干扰和扭曲，不利于对EAU的病因学和致病机制以及资料的研究。