[发明专利]一种座壳孢菌海藻糖酶分离纯化的方法

权利要求书

1.一种座壳孢菌海藻糖酶分离纯化的方法，其特征在于包括以下步骤：

（a）粗酶液的制备: 用培养基培养大子座座壳孢菌菌株，在发酵液中海藻糖酶活性达最高时取发酵液离心，上清液用真空抽滤，收集滤液；向滤液中加入固体硫酸铵至硫酸铵的饱和度为60%wt，4℃静置过夜；再次离心收集沉淀，用磷酸盐缓冲液溶解沉淀；离心溶解液除去不溶物体，上清液装于透析袋，经磷酸盐缓冲液透析后，再用聚乙二醇PEG20000浓缩得到粗酶液；

(b) DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱层析: 用磷酸盐缓冲液平衡过夜DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱层析柱，将粗酶液上样，再用含0-1mol/L NaCl的0.02mol/L pH=6.5的磷酸盐缓冲液进行连续洗脱,收集具有酶活性部份；

(c) Sephadex G-150分子筛层析:用磷酸盐缓冲液充分平衡Sephadex G-150分子筛层析柱，将步骤(b)收集到的具有酶活性部分样上于其中，再用磷酸盐缓冲液进行洗脱；收集有酶活性的部份； 

步骤 （a）、（b）、（c）中磷酸盐缓冲液为磷酸盐缓冲液为0.02mol/L pH=6.0。

2.根据权利1所述的座壳孢菌海藻糖酶的分离纯化方法，其特征在于步骤（a）中三次离心转速均为95000 rpm，但首次离心是在常温下时间为10 min，后两次则是4℃条件离心15 min。

3.根据权利1所述的座壳孢菌海藻糖酶的分离纯化方法，其特征在于步骤（b）中洗脱条件设置为：流速30 mL/h；5 mL/管。

4.  根据权利1所述的座壳孢菌海藻糖酶的分离纯化方法，其特征在于步骤（c）中洗脱条件设置为：流速15 mL/h；5 mL/管。