[发明专利]通过高效液相色谱检测邻氯苯甘氨酸杂质的方法

说明书

技术领域

本发明属于有机分析技术领域，特别涉及一种通过高效液相色谱检测氯吡格雷制备原料之一的邻氯苯甘氨酸所含杂质的方法。

背景技术

硫酸氢氯吡格雷(Clopidogrel Hydrogensulfate)是由法国赛诺菲(Sanofi)公司于1986年开发成功的新一代血小板聚集抑制剂，可用于预防动脉粥样硬化和治疗急性心肌梗死，商品名为“波利维”。该产品于1998年3月率先在美国上市，随后进入欧洲、北美、澳洲、新加坡等多国市场，并于2001年8月在中国上市。它属于噻吩并吡啶类药物，是一种新型的二磷酸腺苷受体拮抗剂，因为具有良好的安全性和快速抑制血小板的优点，从而取代了噻氯匹定成为最广泛应用的抗血小板药物之一。

氯吡格雷的制备方法有很多种，其中以邻氯苯甘氨酸(S)为起始原料的合成路线为酯化、拆分、缩合、环合和成盐等反应步骤。

为了提高药品生产的质量，按照药品生产规范及产品标准，如美国药典(USP)及欧洲药典(EP)的规定，需要对主要原料邻氯苯甘氨酸(S)的质量进行有效的分析和控制。分析邻氯苯甘氨酸的制备及降解过程，可能存在的几种杂质组分为：

当前，分析和检测邻氯苯甘氨酸(S)大多是通过高效液相色谱方法来实现的，其色谱方法一般为：色谱柱(C18/250×4.6mm/5μm)、柱温(25℃)、波长(254nm)、流速(1.0mL/min)和进样量(20μL)；所选用的流动相为：水相/乙腈/四氢呋(85/9/6)，其中水相为20mmol/L的磷酸氢二钾水溶液800mL，盐酸调节至pH＝2.5，并稀释至体积为1000mL。

按照上述方法检测含有对氯苯甘氨酸(杂质B)和邻氯苯甘氨酰胺(杂质C)的底物邻氯苯甘氨酸(S)样品，发现只能显示一个杂质峰，即杂质B和C在该检测条件下并不能很好地得到分离(见图1)。

为了验证上述结果，将对氯苯甘氨酸(杂质B)和邻氯苯甘氨酰胺(杂质C)的对照品混合进样，得到的结果仍然为单峰(见图2)，由此进一步证明了当前通用的邻氯苯甘氨酸(S)的高效液相色谱检测方法，对于杂质分离，尤其是对于对氯苯甘氨酸(杂质B)和邻氯苯甘氨酰胺(杂质C)的分离存在严重缺陷，甚至在该体系下无法有效地分离出这两个杂质。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种改进的利用高效液相色谱检测制备氯吡格雷原料邻氯苯甘氨酸(S)所含杂质的方法。该检测方法能有效地分离邻氯苯甘氨酸(S)的多种杂质，特别是实现对氯苯甘氨酸(杂质B)和邻氯苯甘氨酰胺(杂质C)的高效分离。

为了实现上述目的，本发明主要提供如下技术方案：一种通过高效液相色谱检测邻氯苯甘氨酸杂质的方法，其特征在于所述检测方法包括如下步骤：(1)选择并确定色谱柱、柱温、波长、流速和进样量；(2)配制流动相并确定梯度程序；以及(3)测定并记录色谱图。

此外，本发明还包括如下附属技术方案：

所述色谱柱为C18/250×4.6mm/5μm。

所述柱温30-50℃，优选30℃。

所述测定波长为245-260nm，优选254nm。

所述流速为0.5-1.5mL/min，优选0.8mL/min。

所述流动相A为90-99％体积的20mmol/L的磷酸二氢钾溶液与10-1％体积的甲醇混合后用磷酸调pH值至2.5，优选95％体积的20mmol/L的磷酸二氢钾溶液与5％体积的甲醇混合后用磷酸调pH值至2.5。

所述流动相B为25-75％体积乙腈和75-25％体积甲醇，优选50％体积乙腈和50％体积甲醇。

所述流动相的梯度时间程序为100％-0％/0-40min。

相比于现有技术，本发明所涉及的利用高效液相色谱检测氯吡格雷制备原料之一的邻氯苯甘氨酸(S)所含杂质的方法。该检测方法能有效地分离邻氯苯甘氨酸的杂质，特别是实现对氯苯甘氨酸(杂质B)和邻氯苯甘氨酰胺(杂质C)的高效分离，该方法分离度高、重现性好，对于氯吡格雷原料药生产中的原料控制和质量保证具有重要现实意义。

附图说明

图1是按照一种传统检测方法测定含有杂质B和C的邻氯苯甘氨酸(S)的高效液相色谱图

图2是按照另种传统检测方法测定杂质B和杂质C对照品混合物的高效液相色谱图。

图3是对应于本发明的检测方法的流动相的梯度时间程序。

图4是按照本发明的检测方法测定含有杂质B和C的邻氯苯甘氨酸(S)的高效液相色谱图。