[发明专利]一种抗鸭病毒性肝炎组合物、冻干粉、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种抗鸭病毒性肝炎组合物，以及抗鸭病毒性肝炎冻干粉，同时还涉及该冻干粉的制备方法及应用，属于兽用饲料添加剂技术领域。

背景技术

鸭在我国养殖业中占有较大份额，每年出栏量将近20亿只，产肉量达到近300万吨，年利润达30多个亿。但是，鸭病肆虐为我国养殖业带来了巨大损失，其中，鸭病毒性肝炎，是危害雏鸭最严重的疫病之一。

鸭病毒性肝炎简称鸭肝炎，主要危害20日龄以内的雏鸭，雏鸭日龄越小，死亡率越高，最高死亡率可达90～95%，并且所有的抗菌素对本病无效。早在1958年鸭病毒性肝炎在我国出现，20世纪80年代初期起本病在我国再次流行，1997年以来，鸭病毒性肝炎在某些地区出现较严重的流行，其疫情不能被标准鸭病毒性肝炎I型弱毒疫苗完全地控制，怀疑有I型鸭病毒性肝炎病毒变异株出现。

目前，人们通过疫苗类对抗鸭病毒性肝炎病进行免疫，早期效果较好，但是需要多次接种，操作麻烦，成本较高，容易使畜禽产生应激反应，且疫苗对于保藏条件要求较为苛刻，需在低温下冷藏，室温条件下一段时间则失效。因此，迫切需要一种能够防治鸭病毒性肝炎的产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗鸭病毒性肝炎组合物。

同时，本发明还提供一种抗鸭病毒性肝炎冻干粉。

再者，本发明还提供一种抗鸭病毒性肝炎冻干粉的制备方法。

最后，本发明还提供一种抗鸭病毒性肝炎冻干粉在制备饲料中的应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种抗鸭病毒性肝炎组合物，由以下重量份的组分组成：抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体92～97份，抗鸭病毒性肝炎转移因子1～3份。

一种抗鸭病毒性肝炎冻干粉，由以下重量份的组分组成：抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体95～97份，抗鸭病毒性肝炎转移因子1～2份，灭活剂0.2～0.3份，防腐剂0.01～0.02份，耐热冻干保护剂2.05～3.6份。

所述的灭活剂为甲醛。

所述的防腐剂为硫柳汞。

优选的，所述的耐热冻干保护剂由以下重量份的组分组成：硒0.05～0.1份，维生素C0.5～1份，聚乙烯吡咯烷酮1～2份，甘氨酸0.5份。

一种抗鸭病毒性肝炎冻干粉的制备方法，具体步骤如下：

（1）分离毒株制备疫苗：取鸭病毒性肝炎病毒株增殖、灭活后制得疫苗备用；

（2）免疫健康鸡群制备高免蛋：取步骤（1）制备的疫苗免疫接种健康鸡群，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；

（3）酸化处理：取步骤（2）制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白得卵黄溶液，在卵黄溶液中加入pH值为4.9～5.2的预冷酸化水，加入量为卵黄溶液体积的8倍，混匀后室温下静置沉淀；

（4）取步骤（3）静置后的上清液，按体积加入0.8%的NaCl和NaSO₄混合物，以提高抗体的解离度，离心得含有抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体的上清液；

（5）取步骤（4）中的上清液，上清液中抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体的量为95～97份，再在上清液中加入1～2份的抗鸭病毒性肝炎转移因子，混匀后依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤；

（6）将步骤（5）的滤液浓缩得浓缩液，在浓缩液中依次加入0.2～0.3份的灭活剂、0.01～0.02份的防腐剂及2.05～3.6份的耐热冻干保护剂，混匀后经预冻、冻干处理即得抗鸭病毒性肝炎冻干粉。

所述步骤（2）中第一次使用灭活疫苗正常量，为10^3.2ELD₅₀/0.1ml鸭病毒性肝炎病毒灭活疫苗1.5mL，间隔7天免疫1次，后续每次免疫增加1倍量，于第二次免疫后开始检测抗体效价。

所述步骤（4）中NaCl与NaSO₄的质量比为4:1。

所述步骤（5）中抗鸭病毒性肝炎转移因子可以为市售商品，也可以采用以下方法制备得到：

（1）用灭菌后的生理盐水清洗用鸭病毒性肝炎抗原免疫过的猪脾脏，去其表面筋、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗；

（2）将步骤（1）处理后的猪脾脏破碎，加入2倍预冷的PBS缓冲液，用组织匀浆仪将其匀质得匀浆液；

（3）将步骤（2）中的匀浆液用超声破碎仪处理10min得破碎液；

（4）将步骤（3）的破碎液调至pH值为5.3～5.7，6000rpm离心30min，收集上清液；